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嘧啶核苷酸是一类在生物体中十分重要的低分子化合物,具有非常重要的生理功能,该类核苷酸不仅能作为DNA、RNA合成的前体,还参与生物体内糖蛋白、多聚糖以及磷脂等物质的代谢过程。因此,嘧啶核苷酸在细胞内的含量及其代谢均能直接影响整个细胞的正常代谢以及生物体的生长发育。嘧啶合成主要分为两种途径:从头合成途径以及补救途径。在嘧啶的从头合成途径中共有六种酶的参与,其中第四步的二氢乳清酸脱氢酶(Dihydroorotate dehydrogenase,DHODH),旨在催化二氢乳清酸脱氢氧化生成乳清酸。二氢乳清酸脱氢酶虽不是限速酶,但从头合成途径依赖于该类酶将电子直接供于线粒体呼吸链,由细胞色素C氧化酶接收[1,4]。此外,这类酶是这六种酶中唯一定位在线粒体内膜上的酶类[5]。二氢乳酸脱氢酶广泛存在于生物体中,包括细菌、真菌、藻类、植物以及动物。并在不同的生物体中,其形式可能存在不同[6-8]。本论文依据家蚕基因组数据库,对家蚕二氢乳清酸脱氢酶BmDHODH进行了鉴定、cDNA全长克隆、生物信息学分析、表达分析以及功能的初步探究。主要研究结果如下:1、BmDHODH的鉴定及生物学分析利用NCBI以及家蚕基因组数据库,对BmDHODH进行鉴定,并利用PCR以及RACE技术获得了该基因的cDNA全长序列。通过生物学分析,该基因与其他物种的DHODH具有很高的相似性。具有一个跨膜蛋白结构域,属于非分泌蛋白。2、BmDHODH的的表达分析检测BmDHODH在家蚕各组织(五龄三天)以及各时期的表达情况,结果表明,该基因在分裂分化能力高的组织(精巢、卵巢、头以及丝腺)中的表达量较高。时空表达检测结果显示,该基因在在细胞分裂活动较旺盛的蜕皮前期表达量较高。3、利用DHODH特异性抑制剂来氟米特下调BmDHODH来氟米特是一种能高效、特异性、非竞争性地抑制线粒体内DHODH活性的人工合成药物,能通过抑制DHODH而使嘧啶的从头合成途径阻断在早期。利用来氟米特处理家蚕胚胎细胞系BmE-SWU3,结果表明,细胞的生长增殖受到了明显的抑制,且该药物将细胞周期阻滞在了 G2/M期。4、利用dsRNA干扰BmDHODH的表达为进一步确认BmDHODH是否在BmE-SWU3细胞的生长增殖中起到一定的作用,本论文中利用转染技术,将体外合成的dsRNA导入BmE-SWU3细胞,以特异性的阻断BmDHODH的表达。结果表明,细胞的生长增殖受到了明显的抑制,且细胞周期被阻滞在了 G2/M期。这与来氟米特处理的结果一致,表明确实是由BmDHODH的表达下调,进而影响了细胞的生长及增殖。