甘草总黄酮抗金黄色葡萄球菌作用及其治疗奶牛乳房炎的应用研究

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奶牛乳房炎又名奶牛乳腺炎(bovine mastitis),是临床上奶牛常患疾病之一。该病主要是由于奶牛乳腺受化学、物理以及微生物等刺激和侵袭所导致的一种炎症变化,也是对畜牧业生产以及食品安全危害性最大的疾病之一。常可引起奶牛产奶量和奶汁品质急剧下降甚至失去分泌和生殖能力。奶牛乳腺炎对奶牛养殖业以及乳制品业造成相当严重的经济损失,而且其感染率和发病率都很高。乳房炎患牛的乳汁中可检测到大量的致炎因子、病原菌及其分泌的各种毒力因子,这样的奶汁给食品安全带来极大的隐患,危害人类的健康。而且,目前对乳房炎的治疗一般采用抗菌药乳房内灌注,有些不法经营者为了追求经济利益最大化,不设弃奶期,导致牛奶中残存大量的抗生素,从而引起饮用者过敏反应,尤其在老年人和婴幼儿人群中,其危害更大。另外,患乳房炎奶牛的奶汁中某些成分(酪蛋白、乳脂和人体必需的亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸以及乳糖)的含量明显降低,乳汁的营养成分有所改变,对牛奶的营养成分以及保健作用造成相当大的影响。目前中草药治疗奶牛乳房炎已获得一定的效果以及受到世界性关注,同时也为了克服抗生素对奶牛乳房炎治疗的种种弊端,本研究检测了甘草总黄酮对奶牛乳房炎主要致病菌(金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌)的抗菌活性,研究了甘草总黄酮对主要致病菌之一的金黄色葡萄球菌主要毒力因子表达的影响,观察了甘草总黄酮对临床奶牛乳房炎的治疗效果和进行了相关的生化指标检测。采用试管二倍稀释法检测了甘草总黄酮对三大病原菌的MIC和MBC,发现甘草总黄酮对金葡菌和链球菌具有较强的抑菌和杀菌作用,其MIC和MBC分别在2-16μg/mL和4-32μg/mL范围之内。这一结果提示甘草总黄酮是一种潜在的可开发为抗奶牛乳房炎感染的新药物。进一步研究分析了甘草总黄酮对金葡菌(奶牛乳房炎主要致病菌之一)主要毒力因子表达的影响。本文从表型功能、蛋白和基因三个层面对α-溶血素、肠毒素A、肠毒素B和TSST-1表达进行了分析。研究显示:亚抑菌浓度甘草总黄酮以剂量依赖式方式抑制这些毒力因子的分泌,尤其在1/2MIC时,甘草总黄酮几乎能完全抑制其表达。而且通过RT-PCR分析表明,甘草总黄酮主要在转录水平上抑制这些毒力因子基因以及正性调控这些基因的二元调控系统agr的转录。同样的,这一作用方式也是浓度依赖性。最后,我们观察了甘草总黄酮对临床奶牛乳房炎的治疗效果和进行了相关的生化指标检测。结果表明:经甘草总黄酮给药治疗后,患牛临床症状明显好转甚至痊愈,对34个阳性乳区的治愈率和有效率分别为79.41%和91.18%。而对SOD、GSH-PX、MDA和NO含量的检测发现,用药后可显著提高SOD和GSH-PX的活性以及降低MDA和NO的含量(P<0.01)。另外,经甘草总黄酮治疗后,患牛乳汁中细菌总数量呈急剧下降趋势,和健康对照组并无差异。
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