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目的：本研究拟利用基因工程制备和提纯重组草酸脱羧酶(oxdc)后,用生物佐剂—菌影装载重组草酸脱羧酶,以保护和隔离消化液对草酸脱羧酶的侵袭,使其在胃肠道环境中稳定而持续降解外源性草酸,为探索通过口服药物途径防治草酸钙结石提供新思路. 方法：第一部分按照试剂盒方法提纯枯草芽孢杆菌168的基因组,并以基因组为模板,根据NCBI数据库公布的草酸脱羧酶序列设计引物对oxdc-F/R;PCR扩增草酸脱羧酶oxdc基因序列,将PCR产物经酶切、酶连反应连接至载体pMD18-T并转化DH-5α大肠杆菌,将测序正确的克隆子培养并提取质粒oxdc-pMD18-T,通过双酶切、酶连反应将目的基因oxdc连接表达载体pGEX-6p-1并转化DH-5α大肠杆菌,筛选阳性克隆子并送测序,将测序正确的克隆子培养并抽提质粒得重组质粒oxdc-pGEX-6p-1并将其转化到表达菌株BL21DE3中,得到BL21DE3(oxdc-pGEX-6p-1)重组菌株,将成功表达的重组菌株BL21DE3(oxdc-pGEX-6p-1)活化、诱导表达带标签的草酸脱羧酶(GST-oxdc),然后通过GST亲和层析树脂将GST-oxdc蛋白分离纯化,并用PE006-01A酶,4℃,48h亲和层析柱上切除GST标签,提纯草酸脱羧酶(oxdc).测定草酸脱羧酶的最适pH,,最适温度,pH稳定性,温度稳定性及体外模拟胃肠环境对草酸脱羧酶的影响.第二部分将菌影前体菌—重组菌BL21(DE3)(E-pVB220)接种在液体培养基上28℃,200rpm培养,直到长到OD600nm为0.4,将菌液转移到42℃,200rpm,4h(诱导E基因介导的溶解系统)制备菌影.第三部分将草酸脱羧酶与菌影孵育、装载并检测其降解草酸的活性及其在体外模拟胃肠环境中的稳定性;第四部分设计动物实验,验证和比较草酸脱羧酶(oxdc)与被菌影装载的草酸脱羧酶(BG-oxdc)在防治草酸钙结石中的疗效. 结果：草酸脱羧酶最大酶活为87U/mg,oxdc催化的最适pH值在3.5左右处于酸性范围,最适反应温度为40℃,草酸脱羧酶稳定性表明,草酸脱羧酶pH8.0,4℃环境中的稳定性最好.在体外模拟的胃肠环境中,草酸脱羧酶活性易受胃蛋白酶、胰蛋白酶的侵袭从而导致活性迅速下降.而被菌影装载的草酸脱羧酶(BG-oxdc)可提高对胃蛋白酶和胰蛋白酶的耐受能力.动物实验结果表明被菌影装载的草酸脱羧酶(BG-oxdc)防治草酸钙结晶形成的效率明显优于未装载的草酸脱羧酶. 结论：草酸脱羧酶具有较强的降解草酸的能力,性质稳定,特异性强,但易受胃肠蛋白酶侵袭、降解,利用菌影转载的草酸脱羧酶大大提升了其在胃肠环境的稳定性,在预防泌尿系结石具有一定的临床应用前景.