戊型肝炎病毒(HEV)是一种经粪-口途径传播的人兽共患病病原体。大量的研究表明猪是HEV的天然宿主,虽然HEV感染并不引起猪明显的临床症状,但HEV正是通过这种天然宿主大量复制储存,从而感染人类,给人类公共卫生带来潜在的威胁。本研究提出了一种猪HEV的实验室检测方法,利用该方法对猪屠宰产品中HEV的携带情况进行了调查并建立了SD大鼠HEV感染模型。该研究为动物检验检疫相关部门对猪HEV的监测、诊断等提供了技术支持和基本理论依据。一、猪HEV实验室检测方法的建立目前戊型肝炎主要是通过ELASA(酶联免疫)法检测HEV抗体进行诊断,但HEV感染窗口期、患者自身免疫体制以及ELASA试剂本身等多方面原因给戊肝的诊断带来了难度。HEV RNA检测是判断HEV病毒是否存在的标准之一。本研究采用了两种PCR检测方法检测猪HEV RNA。根据GenBank中已提交的猪HEVORF2特异性片段设计套式简并引物,成功地建立了实验室猪HEV RT-nPCR检测方法。结果表明该方法具有高度的特异性和敏感性,可用于猪屠宰产品的现场调查。同时,根据GenBank中提交的猪HEVORF3特异性片段设计引物,建立了猪HEV的Tag Man探针荧光定量PCR检测方法。该方法具有简便快速、特异性高等优点。二、生猪屠宰产品HEV携带情况调查本研究从上海地区屠宰场采集了120份猪胆汁、120份猪肝脏、120份猪脾脏、120份猪肠系膜淋巴结、126份猪粪便、123份猪血液总共729份样品,利用建立的RT-nPCR方法,对样品中的HEV RNA进行检测,对阳性扩增子进行T-A克隆测序,对获得的序列进行了病毒的系统进化分析,结果表明屠宰场生猪携带的HEV存在于胆汁、血清及粪便样品中。系统进化分析显示上海屠宰场生猪产品HEV既有基因3型又有基因4型HEV毒株。该结果提示,屠宰场必须妥善处理屠宰时产生的血清、胆汁和粪便,以防HEV污染其它屠宰产品。三、猪HEV大鼠感染模型的建立本研究用HEV阳性的猪粪便上清液经尾静脉接种SPF SD大鼠,通过RT- nPCR方法检测HEV RNA,采用间接免疫荧光观察HEV病原在大鼠不同组织中的动态分布情况,同时利用组织病理切片观察攻毒后大鼠不同组织的病理变化。大鼠感染HEV后症状比较明显,在肝脏、脾脏、淋巴结中可观察到HEV抗原,在血清、粪便中能检测到HEV RNA,肝、脾、淋巴结出现病理变化,并在感染后期能检测到HEV抗体,但血清ALT活性没有一致性提升。在整个实验过程中TBIL水平一直处于正常水平,表明HEV感染不影响其胆红素水平。本研究提出了两种猪HEV PCR检测方法——RT-nPCR检测法和Tag Man探针荧光定量PCR检测法,并建立了HEV的SPF大鼠感染模型,研究了大鼠感染HEV后的组织病理变化、HEV在不同组织中的分布以及病毒RNA、血清转氨酶和血清抗体在不同时期的变化。为防止戊型肝炎病的爆发流行提供了前期的理论与技术储备,对戊型肝炎病的综合防治措施制订具有重要意义。