陆地棉紫化突变体花青素累积的分子机理初步研究

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棉花是世界上最重要的经济作物之一;花青素更是植物非常重要的次级代谢产物,是植物产生五颜六色、绚丽多彩的叶片、花瓣和果实颜色的主要色素之一,具有非常重要的生理功能;彩色棉花更以独特天然、环保和多姿多彩纤维而备受青睐,其形成主要是由花青素及其衍生物在纤维腔累积而成,因此,关于棉花花青素合成代谢途径及分子机理研究具有重大的意义。陆地棉HS2紫化突变体是由于外源T-DNA插入破坏下游花青素代谢途径关键酶基因导致突变,从而使整个植株呈现紫色。在自然光下,棉花的组织器官中花青素大量积累,均呈现紫红色,是一个非常有价值的农艺性状,但是其遗传的分子机制目前尚未清晰。  本研究比较了陆地棉(Gossypium hirsutum L.)的背景植株C312和HS2中花青素合成代谢途径的关键酶基因表达,中间产物分析等以揭示紫化突变的分子生物学机理。LC/MS结果显示,自然光下C312和HS2叶片组织中类黄酮的组成单体成分一致;但在温室光照培养下,HS2较C312少了两种类黄酮单体成分。通过荧光定量(qRT-PCR)对关键酶基因的表达水平进行分析,研究了PAL,C4H,4CL-8,CHS,CHI,F3’H,F3H,DFR,LAR,LDOX,ANR,OMT和GST等花青素合成通路中相关的关键酶基因,在自然光照下及温室培养环境两种条件下的表达水平差异。结果显示,这些关键酶基因在突变体和野生植株中,与光照环境变化是有显著性联系的。为探索花青素大量积累现象与光质成分的联系,不同波长光质的处理下的样品组织中,花青素含量随光质和处理时间的不同而变化,并且在50%蓝光(400-500nm,15μmole m-2 s-1),50%红光(600-700nm,120μmole m-2 s-1)和50%远红光(700-750nm,130μmole m-2 s-1)的混合光质处理下,HS2幼苗中花青素含量,最接近自然光照下HS2的花青素积累程度。并且,重点研究了CHS基因在不同光质处理下,其表达水平随时间有节律性变化,并且HS2的CHS在三种光质的混合处理下的表达水平接近自然光环境中的值,但自然光条件下CHS的表达水平最高。综上所述,紫化突变体HS2的花青素积累的主要原因可能是:由于T-DNA插入破坏GhOMT基因,花青素代谢受阻,细胞内所需花青素含量不能满足其正常生理需要;在光照环境诱导下,细胞生理活动需要花青素等重要的次级代谢产物的参与,从而导致花青素代谢通路中其他相关酶基因的表达异常。
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