对虾养殖复合功能型微生态制剂的研制及应用

来源 :福建师范大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:ruqianwusan3
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随着我国对虾养殖产业的迅速发展,养殖环境水质的恶化以及对虾疾病频发已经成为不容忽视的问题,其中养殖水体氨氮过高以及细菌弧菌病害泛滥是影响对虾养殖最主要的两大问题。水产微生态制剂作为一种新型的、无害的生物制剂,应用到养殖水体中能够起到改善水质、抑制水产病害、提高水产动物免疫力以及维持微生态平衡等作用。目前市面上现有的微生态制剂作用往往比较泛,专业性较差,因此,本研究以降氨氮和抗致病性弧菌为目标,通过筛选、驯化开发兼具以上两种专项能力的微生物态菌,以期在对虾养殖中制备针对性和专业性更强的复合功能型微生态制剂。从福清地区对虾养殖场的致病对虾样本,分离得到1株优势致病性弧菌Vf-1,通过16S rDNA分子鉴定方法确定Vf-1为Vibrio harveyi(哈维氏弧菌),说明该养殖场主要致病弧菌为哈维氏弧菌。以实验室的保藏49株芽孢杆菌作为筛选菌株,通过氨氮降解检测,获得20株降氨氮能力强菌株。在此基础上,以哈维氏弧菌Vf-1作为指示菌,从20株菌种中筛选获得抗弧菌效果强的2株菌株FS017和FS037,兼具备较好降氨氮、抗弧菌的性能。通过形态学、生理生化试验及16S rDNA分子鉴定方法确定菌株FS017为Bacillus velezensis(贝莱斯芽孢杆菌),菌株FS037为Bacillus subtilis(枯草芽孢杆菌)。对菌株FS017和菌株FS037分别进行高产发酵工艺优化,以期获得最大生物菌量与抗菌代谢物。通过单因素实验和BOX-Behnken响应面设计优化,确定菌株FS017发酵的最佳培养基成分:蔗糖7.5 g/L、酵母膏24.38 g/L、FeSO4·7H2O 0.313 g/L、(NH42SO4 1.0 g/L、KH2PO4 2 g/L;最佳培养条件为:接种量2.62%、温度33℃、转速180 r/min、初始pH 6.5、装液量45.18 mL(250 mL三角瓶);最终发酵液抑菌圈直径为25.04 mm,生物菌量可达1.19×10100 CFU/mL;菌株FS037发酵的最适培养基成分:葡萄糖8.01 g/L、蛋白胨20.10 g/L、NH4NO3 1.0 g/L、Al2(SO43 0.2 g/L;最佳培养条件为:接种量2.5%、温度30℃、转速195 r/min、初始pH 7.5、装液量45.18 mL(250 mL三角瓶),发酵液抑菌圈直径可达27.67 mm,生物菌量可达8.93×109CFU/mL。考察10种不同载体材料对水体pH值的影响、吸附氨氮效果、对菌体固定化后的降氨氮效果等4种特性,筛选得出综合条件最好载体材料是玉米芯粉,其对水体pH值影响不大,吸水率为379%,对水中氨氮吸附率为17.5%,对菌株FS017固定化后的氨氮去除率为65.25%。设计四种不同方法制备固体微生态制剂,并定期检测制剂中菌体活性,结果表明采用对FS017和FS037菌株发酵液混合后离心并用海水重悬,用玉米芯粉对菌悬液进行固定化,采用冷冻干燥法制备所得微生态制剂活性最高可达10111 CFU/g。将制备所得微生态制剂应用于模拟养殖氨氮污水,氨氮降解率最高可达50.12%;应用于弧菌菌液中结果表明,在弧菌培养液发酵初期投加该微生态制剂,能够有效抑制弧菌生长;在弧菌培养液发酵对数期投加微生态制剂,弧菌数量不再增加,甚至下降,说明该微生态制剂具备较好抗弧菌效果。
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