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IL-33是IL-1家族成员,最近有文献报道它能在体外诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)的生长和分化。而近年来有研究表明,在移植术前过继输注供者骨髓来源的树突状细胞可有效促进免疫耐受,明显延长移植物存活时间。其中,未成熟树突状细胞(iDC)在器官移植中具有更强的诱导外周免疫耐受的效应,而CD103+的树突状细胞也能通过促进机体调节性T细胞(Treg)的分化从而诱导免疫耐受。迄今为止,关于IL-33诱导的BMDC与“经典方法”(用GM-CSF)培养的BMDC在表型及功能上有何不同以及受者输注IL-33诱生的供者来源的BMDC是否能更有效的延长移植物存活时间尚不明确,本课题对此进行了进一步的研究。 目的:以IL-33诱导培养供者小鼠的BMDC,以流式细胞术检测其表型,并将其过继输注给受者后行皮肤移植术,观察受者皮肤移植物存活时间及皮肤移植术后受者体内T细胞亚群分化情况。同时在体外进行混合淋巴细胞培养,检测同种反应T细胞增殖及亚群分化特征,为阐明IL-33诱导的BMDC抑制同种反应T细胞分化而保护移植物提供实验依据。 方法:以IL-33诱导培养供者小鼠的BMDC,以流式细胞术检测其表型(MHC-Ⅱ、CD86、CD80、CD103分子表达水平)。将IL-33诱导培养供体小鼠来源的BMDC与异基因受者小鼠来源的脾脏na(i)ve T细胞共培养7天后用流式细胞术检测培养体系中同种反应T细胞增殖情况及T细胞亚群(Th1,Th17,CD8+IFN-γ+及CD8+IL-17+T细胞)的比例。将IL-33诱导培养供体小鼠来源的BMDC经尾静脉输注异基因受者小鼠,7天后对受者进行皮肤移植,观察皮肤移植物存活时间,并在移植后第3、5、7天分别取受者脾脏细胞行流式细胞术检测,以观察其T细胞亚群的比例变化。 结果: 一、体外实验检测IL-33诱导培养的供者BMDC的表型及其对受者T细胞增殖和分化的影响 1、IL-33诱导培养的供者BMDC的MHC-II、CD86、CD80、CD103的表达水平 在体外将重组小鼠来源IL-33以终浓度为10ng/ml加入培养体系培养BALB/c(H-2 d)小鼠骨髓细胞,以重组小鼠来源GM-CSF(终浓度10ng/ml)诱导培养的BALB/c(H-2 d)小鼠BMDC作为对照,经流式细胞术检测,与对照BMDC相比较,IL-33诱导培养的BMDC低表达MHC-Ⅱ、CD86、CD80分子,为未成熟DC,但高表达CD103。 2、IL-33诱导培养的供者BMDC与受者na(i)ve T细胞混合培养后受者T细胞增殖、亚群分化情况 以重组小鼠来源IL-33以终浓度为10ng/ml加入培养体系体外培养BALB/c(H-2 d)小鼠骨髓细胞,将其诱导培养出的BMDC经丝裂霉素C处理后与C57BL/6小鼠脾脏来源的na(i)ve T细胞共培养7天(IL-33组),将以重组小鼠来源GM-CSF(终浓度10ng/ml)诱导培养的BALB/c小鼠BMDC经丝裂霉素C处理后与C57BL/6(H-2 b)小鼠脾脏来源的na(i)ve T细胞共培养7天的培养体系为对照组(GM-CSF组),用流式细胞术检测C57BL/6(H-2 b)小鼠脾脏来源的T细胞增殖及Th1、Th17、CD8+IFN-γ+及CD8+IL-17+T细胞比例。IL-33组的T细胞增殖及Th1、Th17、CD8+IFN-γ+及CD8+IL-17+T细胞比例明显较GM-CSF组低。 二、IL-33诱导培养的供者BMDC对同种异体小鼠皮肤移植物生存时间及T细胞亚群分化的影响 将IL-33及GM-CSF诱导培养的BALB/c(H-2 d)小鼠来源的BMDC分别过继输注给C57BL/6(H-2 b)小鼠7天后,进行皮肤移植,观察发现输注过IL-33诱导的BALB/c(H-2 d)小鼠来源的BMDC的C57BL/6(H-2 b)小鼠的皮肤移植物存活时间较输注过GM-CSF诱导的BALB/c(H-2 d)小鼠来源的BMDC的C57BL/6(H-2 b)小鼠显著延长,并且其脾脏中的Th1,Th17,CD8+IFN-γ+及CD8+IL-17+T细胞比例明显降低。 结论:IL-33诱导培养的小鼠的BMDC为未成熟DC,且高表达CD103,过继输注给受者后能抑制受者同种反应性T细胞增殖及亚群的分化来抑制同种移植物排斥反应,诱导免疫耐受,延长同种皮肤移植物存活时间,具有潜在的临床应用价值。