论文部分内容阅读
目的：研究辅助性T细胞(Th)亚群调节性T细胞(Treg)、Th17特异性细胞因子及其转录因子在脱髓鞘性视神经炎早期发病中的表达,以明确实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)小鼠脱髓鞘性视神经炎的免疫反应启动及免疫炎症维持机制。方法：1.采用随机数字表法将6-9周龄清洁级C57BL/6(H-2b)雌性小鼠84只随机分为正常对照组12只和免疫后7、11、14、19、23、28d组(模型组亚分)各12只。模型组小鼠分别于背部两侧皮下注射相应抗原200μg,免疫当天记作第0天,于免疫后第0、2天给予模型组小鼠腹腔注射百日咳疫苗400ng,对照组分别注射生理盐水。2.观察视神经炎小鼠的眼部表现及闪光视觉诱发电位(F-VEP)变化；苏木精一伊红染色观察视神经组织学改变；免疫组织化学法检测视神经轴索损伤标志物β-淀粉样前体蛋白(β-APP)表达量的变化；逆转录-PCR (RT-PCR)法检测视神经组织中转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素.-1β(IL-1β)、IL-17、IL-10及叉头蛋白3(Foxp3)的动态表达；小鼠脾脏制备脾单细胞悬液进行Treg细胞的流式细胞学计数。结果：1.免疫后11d,模型组小鼠陆续出现神经系统症状,苏木精-伊红染色可见视神经组织内出现炎症因子浸润,免疫组织化学染色检测发现轴索损伤标志物β-APP阳性染色增强。2.闪光视觉诱发电位检测结果显示：免疫后7、11、14、19、23d及28d组小鼠P1波峰潜时值较正常对照组小鼠延长,差异均有统计学意义(t=4.487、15.203、16.364、11.540、11.959、16.163,P<0.05)；免疫后7d组,与正常对照组小鼠N1-P1振幅的差异无统计学意义(t=-0.992,P=0.378)；而免疫后11、14、19、23d及28d组小鼠N1-P1振幅明显低于正常对照组,差异均有统计学意义(t=-13.161、-31.401、-16.109、-7.025.-7.257, P＜0.05)。3.流式细胞学检查结果显示：CD4+CD25+T细胞和Foxp3+CD4+CD25+T细胞即Treg细胞的数量在发病早期即出现减少,一直持续到发病高峰。与正常对照组相比,CD4+CD25+T/T:F=74.968P<0.05； Foxp3+CD4+CD25+/T: F=51.680P<0.05。11,14,19,23d及28d时组,CD4+CD25+T细胞数量和Treg细胞数量均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。4.小鼠视神经组织中TGF-β、IL-1β、IL-17、Foxp3、IL-10mRNA表达各时间点间整体比较差异有统计学意义(F=12.721、15.015、14.343、69.374、68.290,均P=0.000),与正常对照组比较,免疫后11d、14d组,TGF-βmRNA水平明显升高,免疫后19d、23d组,IL-1βmRNA水平明显升高,免疫后7d、11d组,IL.17mRNA水平明显升高,免疫后7、11、14、19、23d及28d组,Foxp3mRNA水平均明显降低,免疫后19、23d及28d组,IL-10mRNA水平均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：1.EAE模型成功建立了小鼠脱髓鞘性视神经炎。2.Th17细胞亚群参与了脱髓鞘性视神经炎免疫损伤的启动,而Thl细胞亚群维持了炎症损伤,Treg亚群较Th2亚群更早出现异常。Th17/Treg比例失衡参与了脱髓鞘性视神经炎的发病。