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几丁质是昆虫生长和发育的关键物质,任何干扰昆虫几丁质合成的物质都会对昆虫的生长和发育产生剧烈的影响,甚至使昆虫死亡。几丁质合成途径是理想的杀虫剂作用靶标。近几年发展的RNA干扰技术为抑制几丁质合成酶基因的表达提供了一种新方法。
在本实验中,作者尝试从甜菜夜蛾几丁质合成酶基因催化域片断中选择3段拟干扰序列,长度分别为406bp,453bp和260bp,并采用体外转录的方法合成了对应的dsRNA。将所得的dsRNA注射进3龄末期幼虫体内,研究其对目的基因表达的抑制效果。RT-PCR检测结果表明,406bp和453bp这2段dsRNA能够有效地抑制目的基因的表达,并且在注射4天后抑制效果最佳,而260bp没有明显的抑制效果。但尚未观察到表型上的不同,可能是时间不够长或样本量不够大,也可能是dsRNA的干扰效果在表型上还看不出来。
实验结果表明干涉效果受注射dsRNA的量及其应用dsRNA的发育阶段的影响。从注射剂量上看,每头幼虫要注射dsRNA2.0μg左右才能达到干涉效果。从注射时期上看,在3龄末期4龄前几个小时内为最佳时期,这与甜菜夜蛾的发育进程(蜕皮)是相符合的。
实验结果同时还表明注射dsRNA干扰甜菜夜蛾几丁质合成酶基因的表达是可行的,为应用RNAi技术调控甜菜夜蛾的生长发育从而达到控制害虫的目的奠定了基础。