【摘 要】
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目的研究长链非编码 RNA 转录因子 7（long non-coding RNA transcription factor 7,lnc-TCF7）作为新型生物标志物在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）中的表达;研究lnc-TCF7与MM患者的临床特征和预后的相关性;敲低lnc-TCF7对MM细胞增殖和凋亡功能的影响;验证lnc-TCF7和miR-203的靶向调控关系,并探讨ln
【基金项目】
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江苏省卫生厅医学创新团队与领军人才项目（LJ201136）； 江苏省“强卫工程”医学重点学科（ZDXKB2016009）； 南通市科技项目（HS2013067）；
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目的研究长链非编码 RNA 转录因子 7（long non-coding RNA transcription factor 7,lnc-TCF7）作为新型生物标志物在多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）中的表达;研究lnc-TCF7与MM患者的临床特征和预后的相关性;敲低lnc-TCF7对MM细胞增殖和凋亡功能的影响;验证lnc-TCF7和miR-203的靶向调控关系,并探讨lnc-TCF7-MiR-203轴在MM细胞中的作用机制。方法（1）收集86例初治MM患者和30例健康对照者的骨髓浆细胞,RT-qPCR检测lnc-TCF7在两组标本中的表达差异。（2）收集并整理MM患者的相关临床数据资料,利用ROC曲线分析lnc-TCF7的表达量界值并与患者的各项临床指标进行统计学分析,是否存在统计学差异。（3）RT-qPCR检测lnc-TCF7在正常骨髓浆细胞和MM细胞株（OPM2,RPMI8226,NCI-H929,U266）中的表达差异;利用荧光原位杂交技术检测lnc-TCF7在MM细胞株（RPMI8226,U266）中的定位。（4）CCK-8法和流式细胞术分别探究敲低lnc-TCF7对MM细胞株（RPMI8226,U266）增殖、凋亡能力的影响;生物信息学软件预测lnc-TCF7的靶分子,观察敲低MM细胞株（RPMI8226,U266）中lnc-TCF7后靶分子的表达变化;利用双荧光素酶报告基因检测验证miR-203是否是lnc-TCF7的靶分子。（5）通过转染 lnc-TCF7 shRNA（Sh-TCF7 组）敲低 MM 细胞株（RPMI8226,U266）中lnc-TCF7的表达,利用RT-qPCR检测其对靶分子miR-203的表达影响;同时观察miR-203 Inhibitor（Sh-TCF7＆miR Inhibitor 组）是否能挽救敲低 lnc-TCF7 引起的miR-203的表达变化。同时,利用CCK-8法和流式细胞术检测两组细胞株的增殖、凋亡能力变化。（6）生物信息学软件预测lnc-TCF7和miR-203介导的信号调控通路;在挽救实验中利用RT-qPCR和Western Blot法分别检测Jagged1-Notch1信号通路中相关分子的mRNA和蛋白水平表达情况。结果（1）与健康对照组相比,初治MM患者的骨髓浆细胞lnc-TCF7的表达上调,其差异有统计学意义。（2）临床数据资料分析显示lnc-TCF7表达量与MM患病风险有一定的相关性,具有良好的预测价值;lnc-TCF7表达量与患者α2微球蛋白水平和ISS分期有关;lnc-TCF7高表达组的CR率低于lnc-TCF7低表达组,但差异无统计学意义,两组的ORR率相似;生存分析显示lnc-TCF7高表达组的EFS和OS均短于lnc-TCF7低表达组,说明其与患者预后相关。（3）单因素或多因素Logistic回归模型分析显示lnc-TCF7及其他临床指标均与患者CR无关;单变量或多变量Cox比例风险回归模型分析显示lnc-TCF7不是EFS的独立危险因素,而年龄、DS分期及ISS分期是EFS的独立危险因素;单变量Cox比例风险回归模型分析显示lnc-TCF7及ISS分期与更差的OS相关,然而多变量Cox比例风险回归模型分析显示lnc-TCF7不是OS的独立危险因素而ISS分期是OS的独立危险因素。（4）与正常骨髓浆细胞相比,MM细胞株（OPM2,RPMI8226,NCI-H929,U266）中的lnc-TCF7表达显著升高,差异有统计学意义;荧光原位杂交技术检测结果显示lnc-TCF7主要位于MM细胞株（RPMI8226,U266）的细胞质中。（5）与对照组相比,敲低lnc-TCF7可以抑制MM细胞株增殖和促进MM细胞株凋亡,差异有统计学意义;双荧光素酶报告基因检测显示lnc-TCF7可以与miR-203结合,敲低lnc-TCF7可以上调miR-203的表达。（6）与 Sh-TCF7 组相比,Sh-TCF7＆miR Inhibitor 组中 miR-203 表达下降而lnc-TCF7表达水平无显著变化;与Sh-TCF7组相比,Sh-TCF7＆miR Inhibitor组MM细胞株增殖能力显著增加,减弱了敲低lnc-TCF7对MM细胞发挥的增殖抑制作用。（7）与 Sh-TCF7 组相比,RT-qPCR 和 Western Blot 法检测到 Sh-TCF7＆miR Inhibitor组MM细胞株的Jagged1和Notch1表达均上调,差异有统计学意义。结论（1）Lnc-TCF7在MM患者及MM细胞株中表达均上调,与患者临床特征恶化和生存率降低有关,且对MM患病风险具有较好的预测价值,因此可以作为MM的理想生物标志物之一。（2）敲低lnc-TCF7是通过调节miR-203介导的Jagged1-Notch1信号通路发挥抑制MM细胞增殖并且促进细胞凋亡的作用。
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