异源表达生理活性物质的生物合成基因簇是药物研发领域的一个重要的方向,它可通过异源表达来研究基因功能,获得目标化合物或对现有的化合物进行结构改造。生物合成基因簇一般较大,常规的DNA载体由于容量不足、拷贝数较低或不能在不同的异源宿主间穿梭表达而难以对其进行操作。本研究运用重组工程策略和常规的分子生物学克隆手段,将多个异源表达所必须的功能基因克隆至常用的BAC载体pECBAC1,获得了一个可在大肠杆菌-链霉菌-假单胞菌三个常见的异源表达宿主间进行穿梭表达的BAC载体。　　 链霉菌(Streptomyces)属于革兰氏阳性菌中高G+C％类群,具有复杂的发育和分化生长周期,并具有产生抗生素和生理活性物质的特性,是临床用药的重要来源。　　 S.sp81是从土壤中分离得到的一株链霉菌,前期生物学活性分析结果证实该菌能产生多种生物活性物质,但其产生的活性物质难以分离纯化。为了研究其菌体内活性物质的生物合成基因,我们构建了该菌株的基因组文库用于基因表达。　　 提取S.sp81总DNA,经随机剪切,收集得到30kb-40kb片段连接入大肠杆菌/链霉菌穿梭载体pOJ446。经噬菌体蛋白体外包装、侵染宿主菌后,随机挑取2880个转化子以单克隆保存于-70℃30个96孔板中。　　 经检测,所构建的文库覆盖率约为S.Sp81基因组的10倍。S.sp81基因组文库的构建为相关基因簇的克隆和次级代谢产物的分离奠定了基础。