老年人血清对人脐静脉内皮细胞功能的影响

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目的:  以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为实验材料,以健康老年人及老年高血压患者血清作为损伤因素,建立反映健康老年人及老年高血压患者特点的内皮细胞损伤模型,采用MTT比色法检测不同处理组血清对血管内皮细胞增殖的的影响,通过测定各组内皮细胞中一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、活性氧(ROS)的变化,探讨老年人血清对人脐静脉内皮细胞功能的影响。  方法:  取南昌大学第一附属医院妇产科新生儿脐带提取人脐静脉内皮细胞并鉴定,培养3-5代待用,收集健康青年人、正常老年人、老年高血压患者血清各20份,实验按空白对照组、正常青年组、正常老年组、老年高血压组分组,空白组只加培养基,不加血清,各组分别与人脐静脉内皮细胞孵育,在不同时间段收集细胞上清液及细胞,采用MTT方法检测各组血清对内皮细胞增殖情况的影响,采用氧化还原方法检测各组细胞上清液NO含量,酶联免疫吸附实验检测ET-1含量,流式细胞仪检测各组细胞内ROS释放量,采用统计学方法处理数据结果,比较各组结果有无差别。  结果:  1.各组细胞在不同时间段细胞增殖活力也无统计学差异(P>0.05)。在同一时间点,健康青年组、健康老年组及老年高血压组细胞增殖活力在统计学上无显著差异(P>0.05),空白对照组与其他三组细胞增殖活力在统计学上均有显著差异(P<0.05);  2.各处理组血清与内皮细胞孵育12h、24h后,在同一时间点,健康青年组、健康老年组、老年高血压组内皮细胞释放NO均呈梯度降低,差异具有统计学意义(P<0.01),各组内皮细胞培养24h NO释放量比12h NO释放量增加,但差异无统计学意义(P>0.05);  3.各实验组血清与内皮细胞孵育12h、24h后,在同一时间点,健康青年组、健康老年组、老年高血压组内皮细胞释放ET-1均呈梯度增高,差异具有统计学意义(P<0.01),各组内皮细胞培养24h ET-1释放量比12h ET-1释放量增加,差异具有统计学意义(P<0.01);  4.各实验组血清与内皮细胞孵育培养12h、24h后,在同一时间点,健康青年组、健康老年组、老年高血压组内皮细胞内活性氧平均荧光强度呈升高趋势,健康老年组血清及老年高血压血清增加内皮细胞内ROS的产生。  结论:  健康老年人及老年高血压患者血清对人脐静脉内皮细胞功能具有损伤作用,可以减少血管内皮细胞分泌NO,促进ET-1合成及ROS生成,但对血管内皮细胞增殖情况影响不大。
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