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背景先天性气管狭窄是罕见且危及生命疾病,组织工程气管为治疗严重气管狭窄提供了新的思路,但是组织工程气管血管化问题难以解决,血供不足使移植失败。预血管化策略的提出为解决组织工程气管再血管化提供了新的思路,基于细胞膜片技术联合脐静脉内皮细胞构建预血管化细胞膜片已应用于组织工程领域,研究证明其可促进血管形成,但在组织工程气管领域研究尚未见报道。目的1、构建预血管化细胞膜片并初步探讨其特性。2、探讨预血管化细胞膜片复合脱细胞气管支架的在体血管化能力。方法使用全骨髓贴壁方法分离培养BMSCs,加入抗坏血酸干预制备干细胞膜片,将RUVECs与干细胞膜片共培养构建预血管化细胞膜片;使用改良去污剂-酶消化法制备脱细胞气管支架,复合预血管化细胞膜片进行皮下移植,探索血管形成能力。结果1、全骨髓贴壁法获取BMSCs,镜下观察细胞具有贴壁特性,呈纺锤形,检测细胞表面抗原高表达CD90、CD44,低表达CD45、CD34;经成骨、成脂诱导分化,结果显示该细胞具有多向分化能力;2、抗坏血酸干预BMSCs形成干细胞膜片具有机械性、可操作性;组织学检测可知膜片为多层细胞组成,具有大量的细胞外基质,RT-PCR检测结果提示该膜片高表达Col-1、Fn,具有统计学意义(p<0.05)。3、RUVECs具有贴壁特性,呈短梭形、方形或多角型细胞,排列呈“铺路石”样,免疫学检测可知其具有内皮细胞特性。4、RUVECs与干细胞膜片共培养,镜下观察及组织学观察可知实验组细胞出现重排、迁移,随着培养时间延长,逐渐出现条索状、网状结构;免疫组化检测可知实验组细胞膜片出现血管化现象;RT-PCR方法检测血管形成相关因子VEGF、bFGF、Angl、Ang2 mRNA表达,实验组较对照组升高且有统计学意义(p<0.05)。5、HE、Masson染色显示该方法能够去除大部分细胞成分和核物质,并且保留了原生气管结构。6、预血管化细胞膜片复合脱细胞气管支架进行皮下移植,HE染色结果显示皮下移植能够促进血管新生,CD31免疫组化方法检测实验组新生血管面积百分比较对照组高,且具有统计学意义(p<0.05)。结论1、RUVECs及干细胞膜片共培养可在体外构建具备血管网络的预血管化细胞膜片。2、预血管化细胞膜片可促进脱细胞气管支架血管化,为促进组织工程气管血管化提供新的研究思路。