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虎榛子是极度退化生态环境造林的先锋树种,它能够在比较干旱贫瘠的山地上成为优势灌木之一与菌根真菌共生有重要的关系。外生菌根的形成不仅能改变植物和真菌基因的表达,从而产生异常功能蛋白,促进彼此之间的新陈代谢作用。本研究采用组培苗菌根合成技术获得虎榛子组培菌根化苗,分别从菌根组织、根组织及真菌纯培养菌丝中提取NADP-依赖型异柠檬酸脱氢酶,比较三种来源酶的特性,并从三种材料中提取总RNA,进行半定量PCR,比较菌根合成对宿主植物根内NADP-IDH基因的表达情况。 本研究主要内容包括:⑴对接种三株土生空团菌(Cenococcum geophilum Fr.Cg)(CgO5、CgSO1、CgSO11)菌株的虎榛子幼苗进行各项生长指标及菌根侵染率的测定,发现接种CgO5的各生长指标及菌根侵染率都比其他两个菌根真菌好。表明CgO5与虎榛子的共生效果比其他两株强。⑵通过硫酸铵分级沉淀及葡聚糖凝胶层析纯化后的IDH进行SDS-PAGE电泳检测发现,菌根组织、根组织和真菌纯培养菌丝异柠檬酸脱氢酶的单亚基相对分子质量约46kD左右。菌根组织、根组织及真菌纯培养菌丝NADP-IDH的比活力分别为121.12U/mg、115.24U/mg和102.29U/mg;动力学分析表明其菌根组织、根组织及真菌纯培养菌丝NADP-IDH最适pH分别为8.0、7.5和8.5,略偏碱性;最适温度分别为40℃、50℃和45℃,三种来源IDH的活性依赖于不同的二价金属离子的存在,Mn2+、Mg2+存在时酶活性最强,而Ca2+、Zn2+和Ni2+是IDH的强烈抑制剂。菌根组织、根组织及真菌纯培养菌丝NADP-IDH对NADP+的Km值分别为20.83μM、52.63μM和27.7μM;对异柠檬酸的Km值分别为3.12μM、26.31μM和50μM。⑶采用CTAB法提取的菌根组织、根组织及真菌纯培养菌丝总RNA,A260/A280值在1.8-2.0之间,浓度约0.5ug/μL,表明所提取的总RNA中没有DNA干扰,RNA纯度较高,总RNA经过1%琼脂糖凝胶电泳检测完整。半定量PCR检测结果表明,NADP-依赖型异柠檬酸脱氢酶在菌根组织、根组织和真菌纯培养菌丝中均有表达,而且表达量有显著差异,菌根中的表达量最高。