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H9N2亚型禽流感病毒(Avian Influenza virus , AIV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)、禽偏肺病毒(Avian Pneumovirus viruses, aMPV)、大肠杆菌(Escherichia coli , E. coli )、鼻气管鸟杆菌(Ornithobacterium rhinotracheale, ORT )和禽败血性支原体(Mycoplasma gallisepticum, M.G)是常见的能引起肉鸡呼吸道疾病的病原体。这些病原体既可以单独感染,也可以与其他一个或多个呼吸道病原体混合感染使商品肉鸡发病。而当两种或两种以上病原体同时或先后感染机体,可产生协同致病作用,比单一病原体所致疾病严重的多。近年来,呼吸道病原体共感染的报道越来越多,是目前导致我国商品肉鸡呼吸道疾病难于防制的重要原因。为快速、准确的对发生呼吸道疾病的肉鸡脏器中呼吸道病原体进行检测,本研究将AIV H9N2的HA基因、NDV的F基因、IBV的M基因、aMPV的F基因、MG的16SRNA基因、ORT的16SRNA基因和E. coli的16SRDNA基因的部分片段标记为地高辛探针。经灵敏性和特异性实验结果表明,所标记探针特异性强,灵敏度高。为了解山东省肉鸡群中呼吸道病原体的感染情况,本研究从山东省不同地区的商品肉鸡群和死亡鸡胚中分别采集脏器样品,用核酸探针技术对呼吸道病原体进行了检测,以此为呼吸道疾病的防控提供流行病学资料。从山东省济南、潍坊、青岛等地区肉鸡群采集421份有呼吸道症状的病、死鸡肺脏及160份临床健康肉鸡的肺脏进行上述七种呼吸道病原体的检测。结果表明421份发病肉鸡肺脏中AIV H9N2、NDV、IBV、aMPV、MG、ORT和E. coli的检出率分别为53.68%、68.41%、33.49%、54.87%、57.25%、9.02%和49.17%;且存在严重的共感染现象,共感染率高达90.26%,单一感染和阴性个体仅占7.36%和2.38%;发病肉鸡群中七种呼吸道病原体二重、三重、四重、五重、六重、七重感染的检出率分别达19.48%、26.12%、27.32%、11.88%、4.51%、0.95%,以二重、三重和四重感染最为常见。而临床健康肉鸡肺脏中AIV(H9N2)、NDV、IBV、aMPV、MG、ORT和E. coli的检出率分别为12.50%、23.13%、5.63%、36.87%、21.88%、0%和16.88%;阴性和单一样品所占比例分别为25.00%、43.75%;多重感染样品仅占31.25%,且主要为二重感染。上述结果表明,发病肉鸡和临床健康肉鸡均存在呼吸道病原体共感染,但二者差异极显著(P<0.001),发病肉鸡更为严重,呼吸道病原体多重感染是肉鸡呼吸道疾病日益严重的重要原因。本研究对从山东省部分地区采集193份父母代发生呼吸道疾病后的死亡鸡胚脏器样品,用核酸探针技术进行上述七种呼吸道病原体的检测。结果表明H9N2 AIV、NDV、IBV、aMPV、MG、ORT和E. coli阳性率分别为33.33%、44.44%、26.11%、35.56%、48.33%、0%、52.22%,且存在严重的共感染现象,共感染率高达77.72%,单一感染和阴性个体仅占2.59%和19.69%;死亡鸡胚中七种呼吸道病原体二重、三重、四重、五重、六重、七重感染的检出率分别达30.56%、31.61%、11.40%、4.15%、0%、0%,多重感染主要为二、三重感染。上述结果表明,父母代发生呼吸道疾病后,鸡胚孵化过程中的死亡鸡胚中存在呼吸道病原体的共感染,呼吸道病原体多重感染是鸡胚死亡率上升的重要原因。在本研究中从山东省的发病鸡群中分离了1株病毒,经HA、HI试验和病毒回归试验确定所分离的毒株为新城疫病毒,命名为LVCX。按常规方法测得LVCX株的生物学毒力指标MDT、ICPI和IVPI分别为47.4 h、1.975和2.85,鸡胚半数致死量LD50为10-9.8。通过RT-PCR扩增出了LVCX的F基因,通过分析其融合蛋白氨基酸序列发现,分离株LVCX属于基因Ⅶ型,其多肽裂解位点为112-RRQKRF-117。表明LVCX株为NDVⅦ型强毒株。