论文部分内容阅读
兽药残留是指给畜禽等动物不合理地用药所致药物或化学物的原形、代谢产物和杂质蓄积或储存于动物细胞、组织、器官以及可食性产品中的现象。兽药残留的超标不仅会直接危害人体健康,而且还会导致微生物耐药性增强、生态环境毒性等一系列危害。同时,兽药残留相关的食品安全问题的频发,也使其成为国际贸易中的非关税性贸易壁垒,引起了国际社会和各国政府的高度重视,纷纷采取措施对兽药残留进行严格监控。因此,发展快速、简易、高灵敏、高通量的兽药残留检测技术己成为当前的迫切需要。本文研究并建立了同时检测常见的三类(9种)兽药——庆大霉素(GM)、磺胺类药物(SAs)和氟喹诺酮类药物(FQNs)的膜免疫芯片分析法,以分析牛奶和猪肝中的兽药残留。该方法高通量、操作简便、检测时间短、准确,检测结果与HPLC或市售ELISA的结果一致,在小分子有毒有害物质的残留分析领域显示了较好的应用潜力。主要研究内容如下：1.检测抗原GM-OVA和CPFX-BSA的化学合成采用EDC法和戊二醛一步法分别合成了检测抗原GM-OVA CPFX-BSA,经Nanodrop超微量分光光度计测定GM-OVA和CPFX-BSA抗原蛋白浓度,得出GM-OVA和CPFX-BS A抗原蛋白浓度分别为1.0 mg/mL和1.05 mg/mL2.分别检测猪肝和牛奶中SAs、GM和FQNs的Ic-ELISA的建立2.1检测猪肝和牛奶中SAs的Ic-ELISA的建立经棋盘滴定确定了方法的最佳SDZ-BSA检测抗原的包被浓度为6 μg/mL抗SDZ单克隆抗体的工作浓度为1：16000,IC50为0.063 μg/L,线性范围为0.016～0.202 μg/L,牛奶和猪肝样品中SDZ/SMR/SM2/SMDZ 加标回收率在63.0%-117.9%之间,与SMR、SM2、SMDZ的交叉反应率分别为56.3%、50.0%、52.1%,与其他常见抗菌药物未见明显的交叉反应。2.2检测猪肝和牛奶中GM的Ic-ELISA的建立经棋盘滴定确定,该方法的最佳GM-OVA检测抗原的包被浓度为1μg/mL,抗GM单克隆抗体的工作浓度为1：8000,IC50为0.996μg/L,检测范围为0.287～2.473μg/L,回收率在70.9-94.4%,与其他常见抗菌药物未见明显的交叉反应。2.3检测猪肝和牛奶中FQNs的Ic-ELISA的建立经棋盘滴定确定,最佳CPFX-BSA检测抗原的包被浓度为4μg/mL,抗CPFX单克隆抗体的工作浓度为1：8000,ICso为0.346μg/L,检测范围为0.099-0.831μg/L,回收率在60.5-120.4%,与NFLX、ENLX、DFLX的交叉反应率分别为432%、20%、15.5%,与其他常见抗菌药物未见明显的交叉反应。3.同时检测三类(9种)兽药的膜免疫芯片分析法的建立依据Ic-ELISA原理,将检测抗原固定于PVDF上,通过优化包被抗原浓度和抗体的工作浓度,建立了可同时检测三类(9种)兽药的膜免疫芯片分析法,以检测牛奶和猪肝样品中SAs、GM、口FQNs的残留。该方法对于SAs、GM和FQNs的检测阈值分别为50、50和75μg/L,整个检测过程只需要30min,可直观判断结果。采用自建的Ic-ELISA和膜免疫芯片分析法分别检测了市场上随机购买的20份牛奶和8份猪肝样品,检测结果与HPLC法或市售ELISA试剂盒检测结果一致。