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目的:研究手法对实验兔膝关节液一氧化氮(NO)含量和膝骨关节炎(KOA)软骨细胞凋亡的影响及探讨其作用机制。 方法:24只新西兰兔随机分成三组,造模组20只,正常组4只。造模组随机分为手法组10只,对照组10只。造模组动物通过手术结扎右侧股静脉和臀下静脉方法造模,正常组不作任何处理。手法组从第二周(造模后第8天)开始进行手法治疗,共5周。对照组和正常组不治疗。于第8周末处死所有动物,抽取右膝关节液采用硝酸还原酶法检测NO含量;并取右膝关节胫骨平台内侧软骨制片,切片采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal deoxy-nucleotidyl transf-erase mediated nick-end-labeling,TUNEL)标记,在光镜下进行凋亡细胞形态学观察。 结果:手法组右膝关节液中 NO含量为54.62±15.8μmol∕L,对照组为72.47±16.4μmol∕L,正常组为49.23±14.5μmol∕L。NO含量手法组与对照组比较 p<0.05,有显著差异。病理切片中正常组见关节软骨表面光滑,软骨细胞层次结构清晰,表层细胞小而扁平,向下细胞增大并呈柱状排列,少见细胞分裂。正常组从表层至辐射层各层细胞形态清晰,各层细胞未见或少见细胞体积萎缩,细胞核固缩等细胞凋亡的形态学改变。对照组见软骨表面不光滑,表层软骨变薄,粗糙,软骨表面出现多个裂隙,可见裂隙从表层延伸向下达辐射层,裂隙中可见稀疏结缔组织及松散的网状连接,软骨下骨增厚,整个软骨细胞排列紊乱,层次结构不易辨认。裂隙周围可见表现为凋亡形态的脱水固缩软骨细胞,软骨细胞胞体固缩,核染色质边集。表层有部分软骨剥落,形成缺损区,表现出多个空陷窝,软骨细胞部分消失。手法组见关节软骨表面粗糙,但裂隙表浅,软骨细胞排列较对照组密集且整齐。裂隙周围可见部分软骨细胞表现为胞体固缩,核染色质边集的凋亡形态,部分细胞表现为相对正常的软骨细胞形态。但与对照组相比其凋亡细胞所占软骨细胞数目比例明显低于对照组。 结论:手法对防治实验兔膝关节软骨细胞凋亡有肯定的疗效。手法治疗可以减少实验兔膝关节液NO的产生;可以减少膝关节软骨细胞凋亡的发生;可以延缓关节软骨的退行性改变,从而延缓膝骨性关节炎的进展。考虑手法治疗KOA可能是通过减少NO的产生以及减少软骨细胞的过度凋亡发生而起作用。