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鸣禽的鸣唱系统具有明显的性双态性,而且这种性双态是在出生后的发育过程中逐渐形成的。雌激素在发声控制核团性双态的发育中起着重要的作用,还同时亦有大量研究证实雌激素并不是鸣唱系统性双态产生的唯一因素。目前认为在发声控制核团性双态产生的复杂过程中,遗传因素也发挥了一定的作用。因此,在研究雌激素对双态性产生作用的同时,进行雌雄差异表达基因的筛选,为我们揭示鸣唱系统性双态产生的分子机制提供了很好的线索。
通过抑制性削减杂交技术,对幼年雄性白腰文鸟(Lonchura striata)全脑中高表达基因进行筛选,并构建削减文库。随后通过反向Northern杂交进行鉴定。在获得的67个雄性高表达阳性克隆中,通过测序、比对以及文献查阅和分析最终选取名为小清蛋白(Parvalbumin,PV)的基因进行半定量RT—PCR检测,发现PV在PD15(Posthatchling Day15)时,雄性端脑中该基因的表达量显著高于雌性。随后通过原位杂交和免疫组织化学方法,检测了PV mRNA以及蛋白在PD15、PD45以及成年(Adult)三个时期白腰文鸟鸣唱系统中的表达情况。结果显示,PV在前脑各个发声控制核团即HVC、RA、AreaⅩ、以及1MAN中的表达量普遍存在性别差异。其中PV mRNA和蛋白阳性细胞总数在三个年龄组白腰文鸟RA中,雄性均显著高于雌性。在HVC和AreaⅩ中,mRNA和蛋白阳性细胞总数在PD45和Adult两个年龄段的雌雄比较中,同样表现为雄性显著高于雌性。PV mRNA和蛋白阳性细胞密度在三个年龄组HVC中,雄鸟均显著的高于雌鸟。同时成年组RA中的mRNA和蛋白阳性细胞密度也呈现为雄性显著高于雌性。而在三个年龄组雌雄鸟AreaⅩ和1MAN中的PV阳性表达细胞密度均无性别差异。此外,在HVC和RA中,年龄因素对于PVmRNA和蛋白阳性细胞密度的影响极为显著。但在AreaⅩ和1MAN中,细胞密度随年龄变化的程度不明显。已有研究报道钙结合蛋白对于哺乳动物和鸣禽某些脑区的发育以及性别分化存在一定程度的影响。因此根据我们的实验结果推测,同属钙结合蛋白家族中的PV可能在鸣禽鸣唱系统的发育成熟以及性双态产生的过程中发挥一定的作用。