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目的:观察益肾健脾泻浊中药对慢性肾病妊娠大鼠NF-κB/NLRP3-Caspase-1-IL-1β轴及细胞焦亡的影响,探讨妊娠激活醛固酮诱导慢性肾病肾脏NL RP3炎症小体表达及细胞焦亡的机制及益肾健脾泻浊中药的调控作用。方法:将雌性Wistar大鼠随机分为6组:假手术组(Sham)、假手术+妊娠组(SP)、单侧输尿管结扎组(UUO)、UUO+妊娠组(UP)、UUO+妊娠+依普利酮组(EPL)、UUO+妊娠+中药组(TCM)。UUO各组采用结扎单侧输尿管的方法复制慢性肾病模型,Sham、SP组只游离左侧输尿管,不结扎。UUO术后,EPL组给予依普利酮100mg/(kg·d),中药治疗组给予益肾健脾泻浊中药3.11g/(kg·d)治疗,其他各组给予等容量生理盐水,每天1次,连续56天。UUO术后9周妊娠各组大鼠按动情周期与雄鼠合笼,妊娠第18天,将大鼠放入代谢笼收集24h尿液,第19天处死母鼠,留取血清、肾脏。检测各组大鼠肾功能,24h尿蛋白,肾脏病理形态学改变,采取放射免疫法测量血清及肾组织醛固酮含量,TUNEL法检测肾细胞DNA损伤情况。采用SABC法法检测核因子κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)、CD68、核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3[NOD(nucleotide-binding oligomerizaton domain-like receptor protein 3,NLRP3]、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白1(Caspase-1)、白介素1β(Interleukine-1 beta,IL-1β)的表达,及Western blot法检测NF-κB、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达。结果:1.各组大鼠HE染色病理结果显示:Sham组肾小管形态正常,间质无水肿,微量炎症细胞。SP组可见少量的炎症细胞浸润。UUO、UP组肾小管扩张明显,上皮细胞萎缩,胞核染色质浓缩,染色质边集或细胞核消失,大量的炎细胞浸润,肾小管形态不完整。EPL、TCM组肾小管形态较完整,与UP组比较,炎性细胞浸润明显减轻。2.血清及肾组织醛固酮水平变化:大鼠血清及肾组织醛固酮检测结果显示,与Sham组比较,SP组醛固酮含量上升,但无统计学意义。UP组与UUO组比较显著增加(P<0.05),两给药组均显著下调(P<0.05),组间无明显差异。3.Scr、BUN及24h尿蛋白定量:运用血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及24小时尿蛋白评估肾脏损伤,与Sham组相比,BUN及24h尿蛋白两个指标SP组水平显著升高(P<0.05),Scr水平增加,但无明显差异。UUO组各肾功能指标明显增加(P<0.05),表明成功通过单侧输尿管结扎手术建立慢性肾病模型,与UUO组相比,UP组Scr、BUN及24h尿蛋白水平明明显升高(P<0.05),两用药组BUN、24h尿蛋白显著下降(P<0.05),但组间无统计学意义。4.各组大鼠肾组织DNA损伤结果:Sham组见少量TUNEL阳性细胞,SP组阳性细胞率少量增加,UUO组阳性细胞率升高(P<0.05);与SP、UUO组比较,UP组TUNEL染色的细胞阳性率明显升高(P<0.05),主要位于扩张的远端小管上皮细胞为主,与UP组比较,EPL、TCM组的细胞阳性率较UP明显下降(P<0.05)。5.SABC法及Western Blot法检测肾脏NF-κBp65的蛋白表达:SABC法检测结果显示:Sham组大鼠肾脏NF-κBp65在远端肾小管上皮细胞的细胞核中呈弱表达,与Sham组比较,SP组表达增加;与UUO组比较,UP组表达增强(P<0.05);EPL、TCM组与UP组比较表达范围及强度均明显减弱(P<0.05)。Western Blot法检测结果显示:Sham组蛋白含量呈弱表达,SP组表达增强(P<0.05);UUO组蛋白表达明显增加(P<0.05);与UUO组比较,UP组蛋白表达明显增强(P<0.05);EPL、TCM干预后蛋白表达明显减弱(P<0.05)。6.SABC法检测各组大鼠肾脏CD68、NLRP3、Caspase-1、IL-1β蛋白表达:NLRP3、Caspase-1、IL-1β均表达于肾髓质扩张的远端小管上皮细胞胞浆中,CD68主要表达于肾间质。Sham组大鼠肾脏以上蛋白呈弱表达,SP组表达增较;UUO组及UP组表达明显高于正常组和正常妊娠组,且UP组表达高于UUO组;与UP比较,EPL、TCM两组干预导致表达范围及强度均明显减弱。7.Western Blot法检测检测各组大鼠肾组织NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路蛋白表达情况:Sham组以上蛋白均呈弱表达,SP组各项蛋白表达增强,其中Caspase-1、IL-1β明显增强(P<0.05),NLRP3、Pro-caspase-1、Pro-IL-1β表达无显著意义;与UUO组比较,UP组大鼠肾脏NLRP3、Pro-caspase-1、Caspase-1、Pro-IL-1β、IL-1β蛋白表达增强(P<0.05);EPL、TCM干预后各项蛋白表达明显减弱(P<0.05)。结论:1.炎性损伤在慢性肾病妊娠进展中发挥着重要作用,IL-1β、NF-κB等炎性因子参与这一过程。2.Ald发挥致炎作用,妊娠增加Ald含量,增加肾脏负担,是诱导肾病的潜在因素。3.单侧输尿管梗阻上调NLRP3/Caspase-1/IL-1β轴诱导肾细胞焦亡。4.慢性肾病妊娠上调醛固酮含量,通过NF-κB信号通路及NLRP3/Caspase-1/IL-1β轴,诱导细胞焦亡,调控肾脏炎症损伤。5.益肾健脾泻浊中药和醛固酮阻断剂可减轻UUO妊娠大鼠肾脏病理损害,通过抑制Ald-MR/NF-κB/NLRP3-Caspase-1-IL-1β通路减轻肾脏炎损伤及细胞焦亡,改善肾功能。