帕金森(PD)是仅次于阿尔茨海默病的第二大常见神经变性疾病。PD疾病的发生一般以散发型为特征，被认为是基因易感性和例如暴露于毒性的外在因素的共同作用。其基因易感性也是单基因遗传性基因缺陷的结果，目前已经证实与十五种基因有关：PART1～PART11以及DAT基因、TAU基因、Pitx3基因、CTSD基因。这些基因的发现提供了一个研究PD疾病的新视角，但仍未获得对这种疾病的有效治疗措施。DJ-1是被发现与家族性PD有关的第三个基因，蛋白质印迹分析显示DJ-1蛋白广泛存在于肝脏、骨骼肌、肾脏、大脑和睾丸。其在细胞内分布在细胞核、线粒体与胞浆，但主要在细胞浆中。在大脑组织，DJ-1蛋白在边缘系统有大量表达，这些区域包括尾状核、丘脑和黑质、海马区，这些区域与PD的关系最为密切。突变导致的DJ-1功能缺失可以诱发早发型PD，DJ-1的突变率比较低，大约1％。DJ-1蛋白在结构上属于Thij/PfPI家族，含有一个保守序列，这个家族的Thij结构与GAT结构域相关，但却有着不同的功能。DJ-1蛋白有189个氨基酸，一般以二聚体形式存在。在DJ-1晶体中，两个DJ-1单体有着广泛连接，二者接触面积覆盖了整个分子表面的35％面积，其疏水基团与功能有着密切的联系。人与猴、大鼠、小鼠、鸡的DJ-1同源性大约分别为98％、91％、91％、89％，本试验采用大鼠DJ-1作为研究。 本实验分两部分进行。第一部分为线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。通过建立正确的模型，成功进行DJ-1基因的诱导表达。第二部分为大鼠DJ-1的克隆与表达。在建立模型诱导表达后，利用TRIZ0L法进行RNA的提取，以DJ-1的信使RNA为模板，进行RT-PCR扩增出DJ-1编码基因。将该基因克隆入pGEM-TEasy载体，并进行DNA序列分析。在此基础上，将编码DJ-1的基因片断克隆至表达载体pQE30上，获得重组表达载体pQE30/DJ-1(简称为pQE30/DJ-1)，经测序证实重组入表达载体pQE30/DJ-1的DJ-1成熟肽编码基因的序列与GenBank中所检索到的序列完全一致后，将表达载体pQE30/DJ-1转化入感受态细胞E.coliJM109，进行融合表达。表达条件进行优化后，DJ-1的表达量达到50mg/L培养基。目的蛋白含有6×His纯化标签，可以经金属鳌合亲和层析吸附于Ni-NTA树脂层析柱，梯度增加冲洗液中咪唑浓度以去除非特异吸附的杂蛋白后，将目的蛋白洗脱，超滤离心法浓缩。经SDS-PAGE、Westernblotting证实蛋白质产物确实为融合蛋白DJ-1，且融合蛋白具有免疫原活性。 研究表明：由于在国内暂时还没有DJ-1的相关研究，我们进行了DJ-1的初步探索，成功建立了原核表达系统，为进一步研究其蛋白质功能奠定了基础。并且融合蛋白的获得为以后基因工程生产有生物活性的DJ-1奠定了基础，使进一步有效治疗帕金森症成为可能。