硫酸软骨素的制备及其降血脂作用的研究

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以鸡软骨为原料,优化软骨中硫酸软骨素的提取、纯化等工艺流程,并研究硫酸软骨素的抗氧化效果和降血脂的功能。以硫酸软骨素得率为考察指标,对稀碱-浓盐法、超声波辅助碱-酶法、超声波辅助碱-双酶法三种提取方法进行筛选,最终确定超声波辅助碱-双酶法为鸡软骨中硫酸软骨素的最佳提取方法。再应用Box-Behnken中心组合实验设计建立二次多项数学模型,进行响应曲面分析,对胃蛋白酶添加量、酶解温度和酶解时间三个因素进行优化组合,确定超声波辅助碱-双酶法提取硫酸软骨素的最佳工艺条件为:碱液浓度4%,料液比1:6g/mL,Na+浓度2.5mol/L,提取温度35℃,木瓜蛋白酶添加量为1.3:1000g/mL,胃蛋白酶添加量1.39:1000g/mL,酶解温度47.5℃,酶解时间102.5min,硫酸软骨素得率为28.67%,纯度为23.6%。采用阴离子交换树脂法对提取的硫酸软骨素粗品进行第一次纯化,然后继续采用凝胶层析法对硫酸软骨素进行第二次纯化。首先通过静态吸附及解吸实验对离子交换树脂进行筛选,最终确定选用D218型阴离子交换树脂纯化硫酸软骨素。再通过动态吸附及解吸的单因素实验,优化阴离子交换树脂法纯化硫酸软骨素的工艺流程,其最佳工艺条件为:吸附液用量与树脂体积比为1:1;吸附流速为1.0mL/min;吸附时间为60min洗脱剂NaCl溶液的浓度为3.0mol/L;洗脱剂用量与树脂体积比为5:1,最佳解吸时间为75min,硫酸软骨素纯度为72.03%。然后选择葡聚糖凝胶G75进行再次纯化,通过单因素实验确定最佳工艺条件为:洗脱液乙酸-乙酸钠溶液的pH值为4.8,洗脱流速为0.7mL/min,在此工艺条件下得到的硫酸软骨素的纯度为99.30%,较第一次纯化提高了27.27%。采用硫酸-咔唑法对鸡软骨中的提取物进行显色反应,对凝胶层析法纯化后得到的物质分别采用紫外光谱法、高效液相色谱法以及红外光谱法对其进行检测分析,证明从鸡软骨中提取的物质为硫酸软骨素。对鸡软骨中提取的硫酸软骨素进行抗氧化活性研究,结果表明:硫酸软骨素对五种自由基都表现出较好的抑制效果。CS的总抗氧化能力以及对羟基自由基、超氧阴离子自由基和脂质体过氧化体系的抑制率最大可达到30.56U/mL、97.74%、80.69%、48.05%;对烷基自由基最大抑制率为78.57%。对鸡软骨中提取的硫酸软骨素进行降血脂功能的研究,结果表明:对高血脂症小鼠进行灌胃硫酸软骨素后,可降低小鼠血液中的总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白指标,同时升高高密度脂蛋白指标,并且随着硫酸软骨素添加量的增加,作用效果有增强的趋势。
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