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目的：胃癌是消化道中发病率和死亡率均占第一位的恶性肿瘤。近年来，胃癌术后腹膜种植转移复发的严重性日渐突出，治疗棘手，已成为患者死亡的主要原因。研究表明，胃癌细胞增殖能力及其表面粘附分子在侵袭转移过程中起至关重要的作用。最新发现细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-induced killer，CIK）具有较其它过继免疫细胞制备简易、增殖快、杀瘤谱广、活性高等优点，临床应用前景广阔。但关于CIK细胞对胃癌腹膜移植瘤细胞增殖、凋亡及其粘附分子表达影响的研究尚未见报道。本实验通过体外培育正常人CIK细胞、建立人胃癌裸鼠腹膜移植模型，研究腹腔应用CIK细胞对胃癌腹膜移植瘤细胞增殖、凋亡以及侵袭转移过程中粘附分子E-钙粘素、β1整合素表达的影响，探讨CIK细胞对胃癌腹膜种植转移的作用机制，为临床应用CIK细胞治疗胃癌腹膜转移、改善预后提供理论依据。材料与方法：1 CIK细胞的制备：提取人外周血单个核细胞（PBMC），体外用CD3单抗（anti-CD3McAb）、白介素－2（interleukin-2, IL-2）、干扰素-γ（interferon-γ, IFN-γ）、白介素－1α（interleukin-1α, IL-1α）等细胞因子共同培育制备CIK细<WP=4>胞。2 人胃癌裸鼠腹膜移植模型的建立：Balb/c nu/nu裸鼠无特殊病原动物（SPF）环境喂养。传代培养人胃癌高侵袭转移细胞株OCUM-2MD3，裸鼠腹腔注射5×106/0.2ml/只的癌细胞，建立人胃癌裸鼠腹膜移植模型。3 分组：制模后第21天，取裸鼠48只，随机分为实验组和对照组。实验组根据不同的干预时间，随机分为CIK 1、3、5天组（CIK 1、3、5day），CIK 1天组于第1天，CIK 3天组于第1、3天，CIK 5天组于第1、3、5天分别腹腔注射4×107/0.2ml/只的CIK 细胞；对照组随机分为生理盐水1、3、5天组（NS 1、3、5day），各组每只分别腹腔注射0.2ml生理盐水。4 取材方法：各组均在末次注射24小时后取材，脱颈椎处死裸鼠，肉眼观察腹膜移植结节情况，均取大网膜处移植瘤结节，分别用10%中性福尔马林、4%戊二醛、70%的酒精固定，进行相应项目检测。5 观察内容：肉眼、光镜、透射电镜观察腹膜移植瘤组织形态学变化；流式细胞术（Flow cytometry, FCM）检测瘤细胞增殖周期中G0/G1、S、G2/M期细胞比率、凋亡率、计算细胞增殖指数（Proliferation index, PI），并检测粘附分子E-钙粘素、β1整合素表达变化，分析探讨CIK细胞对上述指标的影响及其相互关系。结果：1 正常人PBMC在体外用抗CD3McAb、IL-2、IFN-γ、IL-1α等细胞因子培育可成功制备CIK细胞。2 裸鼠腹腔注射人胃癌高侵袭转移细胞株OCUM-2MD3可<WP=5>成功建立胃癌裸鼠腹膜移植模型。3 形态学观察：3.1 肉眼观察：对照组各组腹腔内弥漫灰白色结节，瘤组织块大，表面粗糙，质脆易脱落。实验组呈现不同程度的结节数量减少、体积缩小。3.2 光镜观察：对照组各组均可见瘤细胞增殖旺盛，细胞核大，深染，病理核分裂像增多。实验组各组瘤细胞出现不同程度的坏死、退变，周围有淋巴细胞浸润。3.3 透射电镜观察：对照组各组瘤细胞核大，核畸形，核质比例失调。实验组各组瘤细胞呈现不同程度的体积缩小、胞浆和细胞核浓缩、核异染色质边集呈半月形、核碎裂等凋亡形态学改变。4 CIK细胞对腹膜移植瘤细胞增殖周期的影响：与对照组相比，实验组各组瘤细胞G0/G1期细胞比率显著增加﹙P＜0.01)，S期细胞比率无显著变化（P＞0.05），而G2/M期细胞比率和PI值显著降低（P＜0.05）；实验组间比较，随CIK细胞作用时间延长，G0/G1期细胞比率逐渐增加，而G2/M期细胞比率和PI值逐渐下降，差异均有显著性（P＜0.05）。5 CIK细胞对腹膜移植瘤细胞凋亡率的影响：与对照组相比，实验组各组DNA直方图上有不同程度的凋亡峰，瘤细胞凋亡率显著增加（P＜0.01）；实验组间比较，随CIK细胞作用时间延长，凋亡率逐渐增加，组间差异显著（P＜0.01）。6 CIK细胞对腹膜移植瘤细胞粘附分子E-钙粘素和β1整合素表达的影响：与对照组相比，实验组各组瘤细胞E-钙粘素表达无显著变化（P＞0.05），且实验组间比较也无显著差<WP=6>异（P＞0.05）；而实验组各组瘤细胞β1整合素表达显著下降 (P＜0.01），实验组间比较，随CIK细胞作用时间延长，其表达逐渐下降，组间差异显著（P＜0.05）。7 腹膜移植瘤细胞凋亡率、PI值与粘附分子E-钙粘素、β1整合素表达之间的相关性分析：瘤细胞凋亡率与PI值负相关（r＝－0.659，P＜0.01)；凋亡率与β1整合素表达负相关（r＝－0.885，P＜0.01）；PI值与β1整合素表达正相关（r＝0.637, P＜0.01）。表明瘤细胞凋亡率、PI值与β1整合素三者之间有内在联系。而凋亡率、PI值、β1整合素表达与E-钙粘素表达无相关性（P＞0.05）。结论：1 正常人PBMC在体外经CD3McAb、IL-2、IFN-γ、IL-1α等细胞因子诱导可成功制备CIK细胞。2 裸鼠腹腔注射人胃癌高侵袭转移细胞株OCUM-2MD3可成功建立胃癌裸鼠腹膜移植模型，该模型可用于胃癌腹膜种植转移发生机制和防治研究。3 CIK细胞作用后，肉眼观察腹腔内移植瘤结节呈现不同程度的减少、体积缩小；光镜观察瘤细胞有不同程度的坏死退变，淋巴细胞浸润；