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背景及目的:Smac作为一种新型线粒体蛋白质,自从2000年7月由Du等[16]首次报道以来作为一种新型抗癌药物得以被广泛研究,SM-164作为Smac蛋白的一种亚型,其抗癌效果更为显著,同时,有多篇报导显示,在体内外试验中,SM-164对人类多种类型肿瘤细胞有明确的抗肿瘤活性,包括前列腺癌,结肠癌,乳腺癌,卵巢癌以及恶性黑色素瘤等[21,25]。本文旨在探究SM-164单药以及联合盐酸盐多柔比星(ADM)对骨肉瘤U-2-OS的增值抑制和凋亡的作用,为进一步探讨其作用机制和可能的信号转导途径,以及SM-164作为一种新型化疗生物制剂用于人骨肉瘤(OS)治疗的可能性。方法:(1)MTT法检测SM-164单药及联合盐酸多柔比星(ADM)对U-2-OS细胞的增殖抑制作用。1)检测不同浓度梯度的SM-164分别单独处理U-2-OS细胞24小时后,U-2-OS的增殖抑制作用,并绘制生长曲线;2)根据前期浓度梯度实验,SM-164作用浓度分别设定为100nM、200nM,而ADM的作用浓度则分别设定为临床用药浓度0.5μg/mL和临床半量浓度0.25μg/mL,分九组:单药SM164-100nM组、SM164-200nM组、单药ADM0.25μg/mL组、ADM0.5μg/mL组、联合用药(SM164-100nM+ADM0.25μg/mL)组、联合用药(SM164-100nM+ADM0.5μg/mL)组、联合用药(SM164-200nM+ADM0.25μg/mL)组以及联合用药(SM164-200nM+ADM0.25μg/mL)组和对照组。(2)Hoechst染色检测U-2细胞凋亡。分别设置对照组、实验组1(ADM0.25/0.5μg/ml)、实验组2(ADM0.25/0.5μg/ml+SM164-100 nM)。(3)流式细胞仪检测ADM(0.25μg/mL、0.5μg/mL)联合SM-164(100nM)诱导U-2细胞凋亡。结果:(1)MTT实验显示:1)当不同浓度梯度(1nM、10nM、50nmol/L、100nM、200 nM、500nM、1μmol/L)的SM-164分别单独处理U-2-OS细胞24小时后,U-2-OS的增殖受到抑制,并随着SM-164剂量的增加抑制程度逐渐增强,但抑制效果并不显著,对U-2细胞存活率没有显著的改变(详见表1,图1);2)SM-164(100nM/200nM)联合ADM(0.25/0.5μg/mL)比单独使用相同浓度的ADM对U-2-OS抑制率均明显加强,两者均表现明显协同效应(详见表2,图2)。(2)Hoechst染色显示:对照组(不加药),其视野内U-2细胞与加药组相比数量虽然较多,但只有很微弱的蓝色荧光;ADM(0.25/0.5μg/mL)组视野内细胞数量有所减少,可见少量蓝色荧光;ADM(0.25/0.5μg/mL)+SM-164(100nM)组视野内U-2细胞致密浓染,清晰可见大量且较强蓝色荧光,提示该组药物促U-2-OS凋亡效果显著。(3)流式细胞仪检测显示:单独用ADM(0.25μg/mL、0.5μg/mL)处理U-2细胞24小时,其凋亡率为(8.53±2.41)%、(12.2±3.11)%;SM-164-100nM处理U-2细胞24小时后,其凋亡率为(6.03±2.01)%;将SM-164-100nM联合盐酸多柔比星ADM(0.25μg/mL、0.5μg/mL)处理U-2–OS 24小时,其凋亡率分别为(36.4±3.68)%、(50.2±5.19)%,SM-164可促进U-2细胞凋亡。结论:1)SM-164单药对U-2-OS增殖抑制作用有限,但是SM-164联合ADM对U-2-OS有明显的增殖抵抗作用,且协同效应十分显著;2)SM-164能明显加强盐酸多柔比星(ADM)诱导U-2-OS的凋亡,在诱导凋亡方面二者协同作用同样显著。