地肤子抑菌成分的提取分离及抑菌作用研究

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地肤子(Kochiae Scopariae),作为中国传统中药,具有抗菌、抗炎、抗胃粘膜损伤及降血糖等功效,通过提高机体免疫力而起到抗敏等作用。地肤子复方制剂对多种皮肤疾病及尿路感染、急性乳腺炎等病症具有较好疗效。本文为开发新型植物源杀菌剂,以地肤子为研究对象,选择辣椒炭疽病菌为指示菌跟踪检测其抑菌性能,并对地肤子水提液抑制植物病原真菌的作用及其活性成分的提取、分离、纯化进行研究。得到如下结论:1.地肤子水提液对10种植物病原真菌均具有较好的抑制效果,且抑制率均在50%以上,其中对于辣椒炭疽病菌效果最佳,抑制率为99.96%,其EC50值2.28×104mg/L,较对照农药多菌灵抑制作用更强。在质量浓度为1.0×105mg/L时,孢子萌发抑制率为95.21%,EC50值为4.04×103 mg/L。2.提取目标成分优选条件:浸提时间48h、环境温度25℃、料液比为1:20,此条件下样液的抑制率为97.18%。3.经大孔吸附树脂纯化及对辣椒炭疽病菌的作用测定后,确定20%乙醇洗脱物活性最强,可达到完全抑制,EC50值为5.46×103 mg/L。4.对地肤子水提液活性部位化学成分经试管预试法测定,初步确定含有黄酮类、萜类及生物碱类等成分。5.选择指示菌为辣椒炭疽病菌,对大孔树脂分离得到活性部位的稳定性进行测定,结果显示:活性部位提取物对高于60℃的加热处理不具有稳定性;而紫外线辐照使成分的活性无显著变化;另外活性成分在酸性环境中稳定性较好;金属离子的加入具有增强抗菌性的功效,其中Na+辅助作用较强。6.采用高速逆流色谱法及硅胶柱色谱法相结合的方法,对地肤子水提液大孔树脂分离得到的活性部位进一步分离纯化,并通过核磁共振波谱技术鉴定,得到地肤子抑菌的有效成分之一为齐墩果酸,并且该化合物表现出较好的抑菌活性,其EC50值为1.12×103mg/L。
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