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秋石斛Dendrobium spp.因自然花期与市场需求高峰错开而导致巨大的经济损失,故有效的花期调控技术是秋石斛产业发展急需解决的问题。本实验克隆了秋石斛’三亚阳光’Dendrobium‘Sonia Hiasakul’的 4 个SOC1 类基因DenSOC1-1 DenSOC1-2、DenSOC1-3、DenSOC1-4基因并对其表达规律进行研究,为明确秋石斛开花调控分子机理进而指导生产奠定了基础。(1)克隆了Denacti 的cDNA,长度为1596 bp,其开放阅读框为1134 bp,编码377个氨基酸,生物信息学分析表明其与石斛属植物具有高度同源性。半定量分析表明Denactin在幼苗叶片和中苗茎尖、根、叶片以及成熟植株茎、根、叶片、花柄、1mm花苞、3mm花苞、5mm花苞、9mm花苞中稳定表达。Denactin一段内含子序列的发现可以有效排除qRT-PCR过程中模板DNA污染可能性,提升了内参基因的品质。(2)克隆了秋石斛4个SOC1类基因DenSOC1-1、DenSOC1-2、DenSOC1-3和DenSOC1-4,其中DenSOC1-1长度为1084 bp,开放阅读框长度为633 bp,编码210个氨基酸;DenSOC1-2长1188 bp,开放阅读框645 bp,编码214个氨基酸;DenSOC1-3长度为1143 bp,开放阅读框609 bp,编码202个氨基酸;DenSOC1-4长930 bp,开放阅读框为672 bp,编码223个氨基酸。4个DenSOC1s具有MADS区、Ⅰ区、K区、C区及SOC1-motif结构域,均属于SOC1类基因的同源基因。生物信息学分析表明四个基因均与兰科植物SOC1类基因具有较高的同源性。(3)通过qRT-PCR对DenSOC1s表达规律进行研究,结果表明:①时空表达规律:各年龄阶段不同组织部位中,DenSOC1-1在中苗茎尖、成熟茎、花梗、花柄及成熟花中高表达,DenSOC1-2在成熟茎、花梗、花柄中高表达,DenSOC1-3在成熟茎和花柄中高表达,DenSOC1-4则在中苗茎尖、成熟茎、成熟叶、花梗及花柄中高表达。DenSOC1-1在不同发育阶段花芽中表达量逐渐下降,在花苞发育初期高表达。各发育阶段花器官中,DenSOC1s主要在成熟花的花瓣与唇瓣中高表达。②日周期表达规律:DenSOC1-1主要在白天表达,而DenSOC1-2 DenSOC1-3、DenSOC1-4主要在夜间表达。③激素处理表达规律:激素处理均促进DenSOC1s的表达。④温度处理表达规律:DenSOC1-2、DenSOC1-3对温度变化不敏感,DenSOC1-1、DenSOC1-4对低温不敏感,但响应高温处理而上调表达。⑤光周期处理表达规律:DenSOC1-1、DenSOC1-4不受光周期节律影响,DenSOC1-2、DenSOC1-3的表达受光周期节律影响。DenSOC1s在短日照与全黑暗条件下的表达高于全光照与长日照条件。(4)构建植物超表达载体DenSOC1-1-pCAMBIA2300、DenSOC1-2-pCAMIA2300、DenSOC1-4-pCAMBIA2300并成功转入农杆菌GV3101。