西尼罗病是由西尼罗病毒引起的人畜共患、虫媒传播的自然疫源性疾病。早在1937年，Smith Burr及其同事从乌干达的西尼罗河地区一个受感染妇女的血液中首先分离到该病毒，命名为西尼罗病毒。 西尼罗病并不是一种新发传染病，只是多数感染者为隐性感染或低热等非特异性症状，因此并未引起研究人员的注意。直到20世纪90年代，尤其是1999年在纽约的暴发流行，导致了人群大规模感染和高死亡率，并伴随大量的鸟类、家禽、马和牛等的死亡，才引起全球公共卫生界的关注。 虽然我国尚无WND报道，但由于我国存在着WND输入和流行的自然因素和社会因素，需高度警惕，开展WNV监测，防止WND传入，WNV监测方法的建立对保护人群健康，维护社会稳定和经济发展具有重要意义在本研究中，采用RT-PCR扩增WNV C-preM蛋白区基因片段，将其克隆至T载体，测序并进行同源性分析。以阳性质粒为模板，建立Nested-PCR和Real-time PCR检测方法，并进行敏感性和特异性检测。所建立的Nested-PCR法和Real-time PCR法可分别检测到1和10拷贝的西尼罗病毒RNA。而对其他黄病毒科成员的检测均为阴性，表明该方法是特异的。 采用RT-PCR方法，扩增WNV E基因D3区，将其克隆至PET32a载体中，构建重组质粒pET-D3，转化大肠杆菌BL21(DE3)，经1.0 mmol/LIPTGG诱导，外源基因以可融性蛋白形式获得高效表达。以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板，建立了检测西尼罗热病毒(WNV)抗体的间接ELISA方法。结果表明，抗原的稀释度为10μg/mL，血清的稀释度为1:100。 应用上述两种方法，检测48例发热病人和2例登革病人血清。Nested-PCR法结果全为阴性。ELISA检测48例发热病人全为阴性，2例登革病人血清弱阳性。本研究建立的两种检测方法具有很高的敏感性和特异性，可用于西尼罗病毒疾病的早期监测和流行病学研究。