【摘 要】
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目的长链非编码RNADLEU2（lncRNADLEU2）在多个肿瘤组织中表达上调,可以与多种微小RNA（miRNAs）作用,调节miRNAs下游基因的表达,构成多个调节网络,参与肿瘤的发生发展。本研究通过探讨DLEU2与miR-655-3p/ADAM10的调控关系及其对生长发育通路β-Catenin信号影响的作用机制,旨在为肝细胞癌的治疗提供新的思路。方法1.使用UALCAN生物信息数据库分析肝细
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目的长链非编码RNADLEU2（lncRNADLEU2）在多个肿瘤组织中表达上调,可以与多种微小RNA（miRNAs）作用,调节miRNAs下游基因的表达,构成多个调节网络,参与肿瘤的发生发展。本研究通过探讨DLEU2与miR-655-3p/ADAM10的调控关系及其对生长发育通路β-Catenin信号影响的作用机制,旨在为肝细胞癌的治疗提供新的思路。方法1.使用UALCAN生物信息数据库分析肝细胞癌组织和正常肝组织样本中DLEU2的表达情况,评估DLEU2高表达与肝细胞癌患者预后的关系及DLEU2启动子与DNA甲基化的关系,并通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测正常肝细胞和肝癌细胞中DLEU2的表达水平。2.过表达或敲低DLEU2后,通过CCK-8实验、克隆形成实验和Transwell实验评估DLEU2对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。3.使用UALCAN生物信息数据库分析肝细胞癌组织和正常肝组织样本中miR-655-3p的表达情况,并通过qRT-PCR检测正常肝细胞和肝癌细胞中miR-655-3p品表达水平。4.StarBase数据库预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证DLEU2和miR-655-3p的结合位点。过表达lncRNADLEU2的肝癌细胞通过转染过表达miR-655-3p,敲低lncRNADLEU2的肝癌细胞通过转染敲低miR-655-3p,分别通过CCK-8、克隆形成实验和Transwell实验评估DLEU2调控miR-655-3p对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。5.StarBase数据库预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-655-3p和ADAM 10的结合位点;通过Western Blotting实验检测miR-655-3p对ADAM 10蛋白表达的调控,并进一步分析DLEU2调控miR-655-3p对ADAM 10及β-Catenin蛋白表达的激活作用。结果1.UALCAN生物信息数据库分析表明,lncRNADLEU2在肝细胞癌中表达上调,DLEU2高表达的肝细胞癌患者预后较差,并且DLEU2启动子显示DNA低甲基化（p＜0.05）;qRT-PCR实验证实DLEU2在肝癌细胞系中的表达高于正常肝细胞（p＜0.05）。2.CCK-8实验、克隆形成实验和Transwell实验结果表明,过表达DLEU2促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力（p＜0.05）,而敲低DLEU2抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力（p＜0.05）。3.UALCAN生物信息数据库分析表明,miR-655-3p在肝细胞癌中的表达下调,qRT-PCR实验证实,miR-655-3p在肝癌细胞系中的表达低于正常肝细胞（p＜0.05）。4.StarBase数据库预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA DLEU2和miR-655-3p存在结合位点。CCK-8实验、克隆形成实验和Transwell实验结果表明,过表达miR-655-3p能够部分消除过表达DLEU2引起的肝癌细胞增殖、迁移和侵袭加快（p＜0.05）,抑制miR-655-3p部分恢复敲低DLEU2引起的肝癌细胞增殖、迁移和侵袭抑制（p＜0.05）。5.StarBase数据库预测并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-655-3p和ADAM10存在结合位点。Western Blotting实验结果表明,在肝癌细胞中过表达miR-655-3p抑制ADAM 10蛋白表达。过表达DLEU2促进ADAM 10蛋白表达并激活β-Catenin信号通路,过表达miR-655-3p能够部分消除该效应;敲低miR-655-3p促进ADAM 10蛋白表达。敲低DLEU2抑制ADAM 10和β-Catenin蛋白表达,抑制miR-655-3p能够部分消除该效应。结论lncRNADLEU2通过调控miR-655-3p/ADAM10表达,激活β-Catenin信号,从而促进肝细胞癌进展。
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