Treg细胞对烧伤脓毒症免疫抑制的影响及药物干预作用

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目的:探讨通过大鼠烫伤创面涂抹铜绿假单胞菌致脓毒症的方法及效果,为开展烫伤创面感染致脓毒症的研究提供动物模型。方法:48只SD大鼠随机分为烫伤组(B组)、烫伤脓毒症A组(创面注射细菌组,BS-A组)、烫伤脓毒症B组(创面细菌涂抹组,BS-B组),每组16只。其中各组再按拟定采血时间分为伤后3天及伤后8天两个亚组。将大鼠背部置于(92±2)℃沸水浸烫18S,制成20%BSA Ⅲ度烫伤模型。伤后即刻在烫伤脓毒症A组的创面真皮内分多点注射1ml含1×103CFU铜绿假单胞株ATCC27953的菌液;在烫伤脓毒症B组创面涂抹1ml含1×105CFU铜绿假单胞株ATCC27953的菌液。烫伤组创面未作处理。所有动物于伤后每天监测存活数,并计算伤后8天亚组大鼠伤后3、8天存活率;接种细菌后分别于第3、8天每亚组取3-7只大鼠行心脏穿刺采血进行血液细菌培养并计算血液细菌培养阳性率。结果进行卡方检验。结果:(1)伤后8天亚组伤后第3、8天的动物存活率:BS-A组分别为50.0%、37.5%和BS-B组62.5%、50%明显低于B组的87.5%、75.0%(P<0.05);其中BS-B组在伤后3天及伤后8天的存活率均稍高于BS-A组,但无明显统计学差异(P>0.05)。(2)伤后第3、8天血液细菌培养阳性率:BS-A组中伤后3天和伤后8天亚组分别为75.0%、100%和BS-B组中伤后3天和伤后8天亚组60%、100%,而B组中伤后3天和伤后8天亚组的血培养均为阴性;BS-A组和BS-B组中伤后3天和伤后8天亚组的血细菌培养结果无明显差异(P>0.05),但与B组中伤后3天和伤后8天亚组相比具有显著差异(P<0.05)。结论:大鼠20%BSA Ⅲ度烫伤创面涂抹1×105CFU铜绿假单胞标准菌株ATCC27953,可复制烧伤后创面铜绿假单胞菌感染所致的脓毒症。与创面注射细菌诱导脓毒症的方法相比,具有病情进展较缓、死亡率高的特点,是开展烧伤创面所致脓毒症的相关研究的理想动物模型。目的:探讨胸腺肽-α1、血必净和中药组方解毒化瘀汤对严重烧伤及烧伤脓毒症大鼠以调节性T细胞为代表的免疫功能变化及炎性反应的影响。方法:62只SD大鼠随机分为(1)正常对照组、(2)烧伤组、(3)烧伤脓毒症组、(4)烧伤胸腺肽治疗组、(5)烧伤血必净治疗组、(6)烧伤解毒化瘀汤治疗组、(7)烧伤脓毒症胸腺肽治疗组、(8)烧伤脓毒症血必净治疗组和(9)烧伤脓毒症解毒化瘀汤治疗组等9组,每组6-8只。取各组大鼠外周血标本及脾脏组织,采用流式检测测定外周血Treg细胞及T淋巴细胞亚群水平和ELISA测定血清TNF-α、IFN-γ、和IL-4、IL-10、PCT和可溶性CD25水平,并采用real-timePCR测定脾脏组织Foxp3mRNA表达水平及免疫组织化学染色观察脾脏人白细胞抗原(HLA-DR)表达情况。结果:(1)烧伤组大鼠外周血Treg细胞、脾脏Foxp3mRNA及HLA-DR表达水平均明显高于正常对照组,但均低于烧伤脓毒症组(P<0.05)。与正常对照组比较,烧伤组血清TNF-α、IFN-γ、和IL-4、IL-10水平及TFN-γ/IL-4比值均明显增高(P<0.05或<0.01),但均明显低于烧伤脓毒症组(P<0.05或<0.01)。(2)与烧伤组比较,烧伤胸腺肽治疗组、烧伤血必净治疗组和烧伤解毒化瘀汤治疗组大鼠外周血Treg细胞及脾脏Foxp3mRNA及HLA-DR表达水平及血清TNF-α、IFN-γ、和IL-4、IL-10水平均不同程度的降低,但仍显著高于正常组(P<0.05或<0.01)。3个治疗组之间比较,烧伤胸腺肽治疗组大鼠外周血Treg细胞及脾脏Foxp3mRNA明显下降及T淋巴细胞亚群CD3+T、CD4+T细胞水平明显升高及CD8+T细胞水平明显下降,烧伤血必净治疗组和烧伤解毒化瘀汤治疗组血清TNF-α、IFN-γ、和IL-4、IL-10水平及TFN-γ/IL-4比值下降较为明显,两组之间比较变化无明显差异(P>0.05)。(3)与烧伤脓毒症组比较,烧伤脓毒症胸腺肽治疗组、烧伤脓毒症血必净治疗组和烧伤脓毒症解毒化瘀汤治疗组大鼠外周血Treg细胞及脾脏Foxp3mRNA及HLA-DR表达水平及血清TNF-α、IFN-γ、和IL-4、IL-10水平及TFN-γ/IL-4比值,较之烧伤脓毒症组均出现不同程度的降低。3个烧伤脓毒症治疗组之间互相比较,烧伤脓毒症胸腺肽治疗组大鼠外周血Treg细胞及脾脏Foxp3mRNA下降幅度及T淋巴细胞亚群CD3+T、CD4+T细胞水平升高幅度及CD8+T细胞水平下降幅度均明显高于其他两组(P<0.05或<0.01),烧伤脓毒症血必净治疗组和烧伤脓毒症解毒化瘀汤治疗组血清TNF-α、IFN-γ、IL-4、 IL-10水平及TFN-γ/IL-4比值下降较为明显,两组之间比较变化无明显差异(P>0.05)。结论:在严重烧伤及烧伤脓毒症状态下,机体在病情进展后期均发生了由Treg细胞、T淋巴细胞亚群、有关细胞因子及炎症介质介导的Th1/Th2飘移,从而表现出不同程度的免疫抑制。通过给予胸腺肽、血必净及解毒化瘀汤均能不同程度地改善机体的免疫抑制,但药物之间主要的调节作用略有差异。
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