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1、在全面分析猪圆环病毒（PCV）两种血清型基因组差异的基础上，设计合成引物，建立了用于PCV1与PCV2检测分型的复合PCR方法。应用该方法对5株猪源细胞系及127份患呼吸道疾病的断奶仔猪病料进行了PCV检测。结果显示，5株细胞都可扩增出PCV1的基因片段，其中1株PK-15细胞还扩增得到了PCV2的DNA片段；上海、江苏、山东及浙江四个省市患呼吸道疾病的猪群中普遍存在PCV感染，其中PCV2感染最为普遍，感染率分别为27.3％（3／11）、15％（3／20）、23.1％（6／26）及48.1％（13／27）；其次是PCV两种血清型的混合感染，四省市的感染率分别达18.1％（2／11）、20％（4／20）、7.7％（2／26）及19.2％（5／27），患呼吸道疾病的猪群中也存在一定比例的PCV1感染。 2、根据Genbank中发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）及猪细小病毒（PPV）基因序列设计合成引物，建立了分别用于检测PRRSV、PPV的RT-PCR及PCR方法。应用建立的方法对38个PCV2阳性病科进行了PRRSV及PPV检测，以确定猪群中PCV2与PRRSV和／或PPV混合感染情况。结果表明，15份样品表现为PRRSV与PCV2混合感染，占样品总数的39.4％；2份样品表现为PCV2与PPV混合感染，占5.3％。另外，还存在一定比例的三重感染，共3个样品，占7.9％。由此可见，猪群中PCV2与PRRSV及PPV混合感染比较普遍。 3、将5份经复合PCR检测为PCV2阳性的病料分别接种无PCV1污染的PK-15细胞，盲传4代，分别用PCR、间接免疫荧光试验（IFA）及超薄切片电镜观察鉴定PK-15上PCV2病毒增殖情况。结果表明，从5株PK-15细胞中均扩增出了1154bp的PCV2特异条带；IFA试验显示细胞核中含有大量的病毒抗原；在电镜下可见到典型的PCV2病毒颗粒，直径约为17～20nm。将分离的5株PCV2分别命名为JiangsuPCV、ShanghaiPCV、Zhejiang1PCV、Zhejiang2PCV及ShandongPCV，并测定了各毒株的TCID50。以分离的PCV2病毒作为抗原建立了用于检测PCV抗体的IFA方法。应用该方法对临床送检的133份血清样品进行PCV抗体检测，结果显示，PCV抗体阳性率达58.9％。 4、根据Genbank中发表的PCV2毒株的全基因组序列，设计一对特异性引物，用PCR方法扩增出5个PCV2分离毒株的全基因组。将扩增片段克隆于pcDNA3载体的EcoRI酶切位点，经氨苄青霉素（Amp）抗性筛选及EcoRI酶切鉴定，获得5个含有不同PCV2全基因组的阳性重组质粒，分别命名为pcDNAJSpcv、pcDNASHpcv、芦银华:华东地区猪圆环病毒2型的分子流行病学调查及其感染性核酸的构建peDNAZJlpev、peDNA刀Zpev及peDNAsDPcv。对质拉中的插入片段进行序列测定表明，5个全基因组扩增片段均长1 768bP，与资料报道相符。应用DNAstar序列分析软件，对测定的5个PCVZ分离株序列与Genbank中的国内外PCV毒株进行同源性比较并绘制系统发生树，结果表明本实验的5个PCVZ毒株与世界上其它地区的PCVZ分离株密切相关，核普酸序列同源性为94.5%一100%，与PCVI毒株的序列同源性只有69.7%一71.1%。另外，不同PCvZ毒株之间基因组序列相对比较保守，但来源于不同地区的PCVZ分离株基因组序列存在明显差异。系统发生进化树显示，本实验中的shanghaipcv、zhejianglPCv、JiangsupCv三个毒株与一美国毒株AfZ尔旧39亲缘关系较近，shandongPCv与劝句langZpCv与一德国分离株AF201311有较密切的亲缘关系。 5、通过两种方法构建了猪圆环病毒2型的感染性核酸。1)、将已构建的含单拷贝PCVZ全基因组的重组质拉peDNA讲v用石七口RI酶切，获得PcvZ全基因绷1 768bP)的双链形式，在体外用T4 DNA连接酶连接环化;2、用石七口RI对peDNApev质粒进行不完全酶切，获得含有PCVZ全基因组单拷贝的线性载体，去磷酸化后与另一个PCVZ全基因组拷贝连接，转化DH5a感受态细胞，通过氛千青霉素（AmP）杭性筛选及EcoRJ酶切鉴定，获得含有双拷贝的重组质拉peDNAd伴v。对质拉中序列进行浏定，发现2个拷贝的全基因组一前一后同一方向排列。用脂质体法将双链PCVZ全基因组体外环化产物、重组质粒peDNA伴v及peDNAdPcv分别转染无PCv污染的PK一巧细胞，4次连续传代后，用PcR、间接免疫荧光试验（开汽）及超薄切片电镜观察，发现转染体外环化产物及peDNAdpcv的细胞中存在具复制能力的PCvZ病毒，而转染重组质拉peDNA伴v的细胞未检测到病毒的产生。将转染后获得的病毒感染PK一巧细胞，用正叭进行检测，可以见到细胞核内存在大量的病毒抗原。由此可见，本试验构建的环化的双链PCvZ全基因组及含有双拷贝基因组的重组质粒peDNAd拌v具有感染性，从而为进行PCVZ致病性及致病机理研究打下了基础。