环状RNA ANKS1B在前列腺癌侵袭及肽修饰的金纳米星在前列腺癌治疗中的作用及机制研究

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第一部分环状RNA ANKS1B在前列腺癌侵袭中的作用及机制研究背景:越来越多的研究表明环状RNA(circRNA)在人类疾病中发挥着关键作用,并显示出作为诊断的生物标志物和治疗靶点的巨大潜能。本研究旨在探讨circANKS1B在前列腺癌(PCa)中的表达及作用。方法:通过 qRT-PCR 检测环状 RNA circANKS1B 及小 RNA miR-152-3p 在 PCa 中的表达;通过细胞迁移和侵袭实验检测circANKS1B在PCa细胞中的作用;通过双荧光素酶报告基因验证circANKS1B与miR-152-3p之间的直接作用关系;通过拯救实验验证circANKS1B是否通过circANKS 1B/miR-152-3p/TGF-α信号通路来调控PCa细胞的侵袭能力。结果:circANKS1B在PCa细胞及组织中均明显高表达,且高表达的circANKS1B水平与PCa患者差的预后相关。双荧光素报告基因检测表明circANKS1B可直接靶向于miR-152-3p。此外,circANKS1B可负性调控miR-152-3p的表达。在PCa细胞中,下调circANKS1B的水平可显著抑制细胞的迁移及侵袭能力以及TGF-α的表达水平,而circANKS1B的这一作用可被miR-152-3p的沉默所逆转。此外,miR-152-3p的下调对circANKS1B沉默的PCa细胞侵袭能力的影响也可以被TGF-α的沉默所逆转。总之,circANKS1B作为miR-152-3p的海绵通过上调TGF-α的表达来促进PCa的进展。结论:我们的研究表明circANKS1B可能是PCa一个潜在的判断预后的标志物及治疗靶点。第二部分肽修饰的金纳米星在前列腺癌治疗中的作用及机制研究背景:阻断程序性死亡受体-1(PD-1)和程序性死亡配体-1(PD-L1)之间的相互作用可以恢复T细胞活性,增强抗肿瘤免疫。PD-1/PD-L1通路抑制剂在晚期前列腺癌(PCa)的治疗中具有良好的应用前景。方法:选取金纳米星(AuNS)作为核心,对AuNS表面进行PEG分子修饰,然后通过酰胺反应与PD-L1结合肽(PD-Llpep)结合;通过共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察DU145细胞对P-AuNS的摄取;通过蛋白免疫印迹(WB)检测P-AuNS对PD-L1的降解,并通过CLSM观察P-AuNS在细胞内的转运;通过Jurkat细胞与DU145细胞的共培养体系检测P-AuNS对T细胞活力的恢复情况;通过PCa的荷瘤小鼠模型研究P-AuNS在体内的抗肿瘤效应。结果:我们成功地合成了一种肽功能化的金纳米结构P-AuNS,由PD-L1结合肽(PD-L1pep,P)和金纳米星(AuNS)组成。P-AuNS能与细胞表面PD-L1特异性结合,并能高效地将PD-L1导入PCa细胞内。在PCa细胞中,P-AuNS能以溶酶体依赖性的方式有效地降解PD-L1。在Jurkat细胞与DU145细胞的共培养体系中,P-AuNS可恢复被共培养DU145细胞抑制的Jurkat细胞的增殖能力及IFN-γ的分泌水平,表明P-AuNS可有效阻断PD-1与PD-L1之间的结合。此外,在PCa的小鼠荷瘤模型中,P-AuNS可有效抑制肿瘤的生长并下调PD-L1的蛋白水平,且体内实验结果表明P-AuNS没有全身毒性。结论;纳米结构P-AuNS通过有效降解PD-L1来阻断PD-1和PD-L1之间的相互作用,从而恢复T细胞的抗肿瘤活性并抑制PCa的肿瘤进展。P-AuNS作为一种潜在的免疫治疗策略,在晚期PCa甚至其他实体瘤的治疗中具有广阔的前景。
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