【摘 要】
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[目的]:构建Id1 miRNA真核表达载体,并成功转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株,筛选稳定表达的乳腺癌细胞株,观察对乳腺癌细胞的对Id 1、MMP 9表达的影响。[方法]:利用Invitrogen公
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[目的]:构建Id1 miRNA真核表达载体,并成功转染乳腺癌MDA-MB-231细胞株,筛选稳定表达的乳腺癌细胞株,观察对乳腺癌细胞的对Id 1、MMP 9表达的影响。[方法]:利用Invitrogen公司网上BLOCK-iT miR RNAi设计工具,设计针对Id 1基因（ID:3397）的两个转录版本mRNA（NM002165.2和NM181353.1）都有效的干扰序列。将干扰序列插入pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR表达载体,构建Id1miRNA真核表达载体,通过脂质体转染法转染到乳腺癌MDA-MB-231细胞株,以杀稻瘟霉素筛选稳定表达的细胞株。经RT-PCR方法鉴定其对Id1、MMP9表达的影响。[结果]:成功构建Id1 miRNA真核表达载体,经电泳及测序鉴定正确,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞系。经过2W杀稻瘟霉素筛选,获得稳定表达的细胞系。经RT-PCR方法鉴定,结果表明转染Id1 miRNA真核表达载体的乳腺癌MDA-MB-231细胞株其Id 1、MMP 9表达水平低于对照组,且Id 1、MMP 9表达水平正相关。未转染组与阴性对照转染组无明显差异。[结论]:本实验成功构建Id1 miRNA真核表达载体,并成功转染乳腺癌MDA-MB231细胞株,筛选出稳定表达Id1 miRNA的乳腺癌细胞株,证实干扰有效,并且Id1与mmp9表达相关,为将来进一步研究他们之间的生物学行为差异,或详细了解其分子作用机制奠定了基础。
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