前言先天性巨结肠（Hirschsprung’s disease,HD）是婴幼儿常见的消化道畸形,是一种肠神经系统（Enteric nervous system,ENS）发育异常的疾病。神经嵴源性细胞进入肠道后逐渐迁移、增殖、受肠道微环境影响后停止增殖,逐渐聚集最终分化形成神经节细胞及胶质细胞,构成肠神经节,在此过程中出现任何异常都可能导致神经节细胞的缺失,最终形成HD。三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate,ATP）作为一种神经递质,可能参与了神经元的分化、迁移、存活,还可以促进神经元的修复,其作用的发挥必需与受体结合,其受体有P1、P2两种,P2受体又分为P2X、P2Y。目前为止已发现的P2Y有8个亚型,其中在胃肠道P2Y₂亚型分布最为广泛。在肠神经系统内,P2Y受体主要调节肌肉的松弛,在肠神经系统发育过程中如果P2Y₂表达缺失可能导致肠管的松弛功能障碍,从而使肠管处于持续痉挛状态,这揭示了P2Y₂与HD的发生存在一定关系,但P2Y₂在HD肠管的表达及分布情况国内尚未见报导。本研究通过观察HD患儿正常段、移行段和痉挛段内P2Y₂受体的分布及相对表达量,以正常段为对照组,移行段及痉挛段分别设为实验组1和实验组2,比较相互之间P2Y₂的分布及表达情况是否存在差异,进一步探讨这种差异在HD发病机制中的意义。材料与方法一、病例标本收集来自中国医科大学附属盛京医院小儿外科的30例经手术根治的HD患儿的手术标本,患儿年龄为23天-5.5月（男25例,女5例,平均年龄67.37±42.28天）,其中长段型5例,短段型6例,常见型19例。二、实验试剂P2Y₂多克隆抗体（购自美国Abcam公司）;二步法山羊免疫组化检测试剂盒（购自武汉博士德公司）;逆转录试剂盒（购自大连宝生物工程有限公司）。三、实验方法选取患儿肠管标本的正常段、移行段和痉挛段全层组织分别设为对照组、实验组1及实验组2,通过免疫组化方法及RT-PCR方法观察P2Y₂在各组中的分布及表达,所有数据均以（?）±s表示,差异比较采用SPSS13.0统计软件分析,组间差异采用方差分析,p<0.05表示差异有统计学意义。结果一、免疫组化结果在对照组及实验组1肠管标本的纵肌层、环肌层和肌间的神经丛中可见P2Y₂阳性细胞的分布及表达,与对照组相比较,实验组1中P2Y₂阳性细胞的数目少且免疫反应较弱,差异具有统计学意义（P<0.01）。实验组2肠管标本中则未见P2Y₂阳性细胞的分布及表达,与对照组相比差异明显（P<0.01）。二、RT-PCR实验结果在对照组（正常段肠管）及实验组1（移行段肠管）中P2Y₂ mRNA均有表达,相对表达量分别为（0.5736±0.07066）、（0.2679±0.3817）,其差别具有统计学意义（P=0.000）,P2Y₂mRNA在实验组2（痉挛段肠管）中无明显表达,其与对照组、实验组1标本中P2Y₂的表达具有显著性差异（P分别为0.00,0.011）。结论与正常段肠管组织相比,HD患儿病变段肠管中ATP受体P2Y₂表达缺失或者显著减低,P2Y₂的表达缺失可能导致肠管的松弛功能障碍使肠管处于痉挛状态,有可能在HD的发生过程中发挥了一定的作用。