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目的:利用6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导PC12细胞建立帕金森病细胞模型。
方法:采用大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(Pheochromocytoma cells,PC12)PC12进行细胞培养,应用神经生长因子诱导其分化为神经元,并用免疫组化方法遴选出高表达酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)的多巴胺能神经元。然后用不同浓度(10μmol/L、50μmol/L和100μmol/L)的6-OHDA诱导细胞损伤,应用乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)法检测细胞损伤程度,用流式细胞术(Flow cytometry)证实多巴胺能神经元的损伤形式为凋亡,符合PD的病理过程。
结果:形态学观察和LDH测试显示,实验组中多巴胺能神经元的损伤程度与6-OHDA有时间剂量依赖关系,用50μmol/L6-OHDA诱导细胞损伤24小时最接近于凋亡状态;与对照组比较,实验组多巴胺能神经元损伤(28.22±1.62)明显高与对照组(2.46±0.24),具备统计学意义(P<0.05):流式细胞术检测证实50μmol/L组6-OHDA作用24小时,凋亡细胞数占总细胞数的84.92±0.34%,显著高于对照组及其他10μmol/L组(4.36±0.07)和100μmol/L组(1.62±0.08)水平(P<0.05)。
结论:本实验所筛选出的多巴胺能细胞都表达了TH;10μmol/L、50μmol/L和100μmol/L6-OHDA作用24h均引起多巴胺能神经元的损伤,随着药物浓度的增加,多巴胺能神经元损伤的程度越显著;50μmol/L6-OHDA是诱导多巴胺能神经元凋亡的最适浓度。