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目的: 本课题主要通过急性、慢性肝损伤动物模型及黄疸动物模型,观察三味干姜散的保肝退黄作用,阐释其临床应用的药理学基础,为其临床应用提供依据,也为藏医药的研究提供数据。 方法: 1.通过对不同的肝毒剂四氯化碳和D-氨基半乳糖所致的小鼠化学性急性肝损伤模型,检测血清中ALT和AST含量,研究三味干姜散对化学性肝损伤的保肝作用。 2.通过对ConA所致的免疫性肝损伤小鼠模型,检测血清中ALT和AST含量,并进行病理切片观察,研究三味干姜散对免疫性肝损伤的保肝作用。 3.通过对乙醇所致的小鼠急性酒精性肝损伤模型,检测血清中ALT和AST含量,研究三味干姜散对急性酒精性肝损伤的保肝作用。 4.通过对对乙酰氨基酚所致的药物性肝损伤模型,检测血清中ALT和AST含量,研究三味干姜散对药物性肝损伤的保肝作用。 5.通过对乙醇所致的慢性肝损害动物模型,检测血清和肝匀浆中ALT、AST含量。研究三味干姜散对慢性肝损害的保肝作用。 6.采用分光光度法检测四氯化碳急性肝损伤模型中CAT和GSH的含量;在大鼠慢性酒精性肝损伤模型上利用RT-PCR技术检测肝脏中HIF-1αmRNA的表达,研究三味干姜散的抗氧化作用机理。 7.利用三味干姜散对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致的小鼠急性胆汁淤积模型,分离血清,以血清ALT、AST、AKP、TBIL为观察指标来探讨三味干姜散的退黄作用。 8.在α-萘异硫氰酸酯(ANIT)灌胃诱导大鼠肝损伤的基础上,结合中药大黄灌胃加寒湿环境因素,建立中医阴黄证黄疸动物模型。观察药物作用后大鼠的一般生物学状态,分光光度法检测血清ALT、AST、AKP、TBIL水平,免疫组化法观察大鼠肝脏IL-2、TNF-α表达水平。以研究三味干姜散对阴黄证的治疗作用及可能的作用机理。 结果: 1.三味干姜散0.17g/kg剂量组不能显著降低四氯化碳引起的小鼠急性化学性肝损伤模型中血清ALT、AST水平,0.33g/kg剂量组、0.66g/kg剂量组均能明显的使升高的ALT、AST下降(P<0.05)。0.17g/kg、0.33g/kg剂量组均能降低D-氨基半乳糖所致小鼠化学性急性肝损伤模型血清 ALT、AST水平(P<0.05);0.66g/kg剂量组无此作用。 2.三味干姜散不同剂量组(0.17g/kg、0.33g/kg、0.66g/kg)对ConA引起的小鼠急性免疫肝损伤模型均有显著降低血清ALT、AST水平(P<0.05),有明显的保肝作用。病理结果显示能明显改善肝组织的病理学损伤。 3.三味干姜散0.66g/kg剂量组能够显著降低酒精所致小鼠急性酒精性肝损伤模型血清ALT水平(P<0.05),有较为明显的保肝作用。而0.17g/kg、0.33g/kg剂量组能够显著的抑制模型小鼠血清AST水平的升高,统计学表明有显著保肝作用。 4.三味干姜散0.66g/kg剂量组药物可降低对乙酰氨基酚引起的小鼠药物性肝损伤模型血清ALT、AST升高(P<0.05),有明显的保肝作用。 5.三味干姜散0.66g/kg剂量组对乙醇所致的慢性肝损害动物模型肝匀浆中 ALT水平下降(P<0.05),有一定的保肝作用。 6.三味干姜散0.33g/kg、0.66g/kg剂量组能显著升高四氯化碳引起的肝损害模型小鼠肝组织匀浆中 CAT、GSH活性(P<0.05)。在慢性肝损伤大鼠模型实验中阳性组能降低模型组 HIF-1αmRNA含量(P<0.05),具有保护作用。同时0.66g/kg剂量组在一定程度上能降低模型组 HIF-1αmRNA含量,但与模型组比较无统计学差异。 7.三味干姜散对于α-萘异硫氰酸酯所致小鼠的退黄降酶作用实验结果表明,与正常组比较,模型组小鼠血清ALT、AST、AKP、T-BiL含量显著升高(P<0.05),说明造模成功。同时0.17g/kg剂量组能降低高胆红素(P<0.05)。 8.在α-萘异硫氰酸酯(ANIT)灌胃诱导大鼠肝损伤的基础上,结合中药大黄灌胃加寒湿环境因素,中医阴黄证黄疸动物模型建立成功。实验结果表明,阴黄证大鼠出现明显阳虚表现,体重显著下降,模型组中胆红素和血清酶含量显著升高(P<0.05), IL-2水平、TNF-α水平均升高。经三味干姜散组(0.33g/kg)治疗后,动物一般形态、血清胆红素、血清酶学、肝脏病理均有一定改善作用,但IL-2水平、TNF-α水平无明显改善,说明三味干姜散的退黄作用与抗炎、免疫调节作用关系不大。 结论: 藏药三味干姜散对不同肝毒剂引起的急慢性肝损伤有较明显的保肝作用;对α-萘异硫氰酸酯(ANIT)所致小鼠急性黄疸模型实验有退黄降酶的作用;对阴黄证大鼠模型有一定的退黄作用。三味干姜散的保肝作用与抗氧化有一定关系。