【摘 要】
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目的:类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种自身免疫性疾病,以关节肿胀和变形为特征。若不及时加以控制,将会导致残疾,严重影响患者的生活质量。目前已上市的治疗RA的药物均存在不同程度问题,因此,寻找安全有效的治疗RA药物迫在眉睫。据文献报道多种人参皂苷对RA具有显著的治疗作用,但其治疗的药理作用及其机制尚不明确,并缺少不同种人参皂苷作用强度和治疗效果的比较。据此,本研究
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目的:类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）是一种自身免疫性疾病,以关节肿胀和变形为特征。若不及时加以控制,将会导致残疾,严重影响患者的生活质量。目前已上市的治疗RA的药物均存在不同程度问题,因此,寻找安全有效的治疗RA药物迫在眉睫。据文献报道多种人参皂苷对RA具有显著的治疗作用,但其治疗的药理作用及其机制尚不明确,并缺少不同种人参皂苷作用强度和治疗效果的比较。据此,本研究根据人参皂苷结构及药理活性的差异,通过预实验筛选出六种人参皂苷单体,分别为Rg1、Rg3、Rg5、Rb1、Rh2和CK,通过体内和体外实验,考察并比较六种人参皂苷对RA的干预作用,以期优选出疗效最佳的人参皂苷,为后续的研究开发奠定基础。方法:本研究体通过体外细胞和体内动物两个方面的实验,考察了六种人参皂苷对类风湿关节炎的干预作用。体外实验中,通过MTT法考察人参皂苷对RAW 264.7和HUVEC细胞的毒性,筛选出各种人参皂苷对于两类细胞的安全浓度范围;在此基础上,分别以LPS诱导RAW264.7细胞和TNF-α诱导HUVEC细胞模拟患者体内细胞环境,考察人参皂苷对异常增殖细胞的抑制作用;通过流式分析技术开展细胞凋亡实验,进一步探索人参皂苷促进异常增殖细胞的凋亡途径。体内实验中,采用Ⅱ型胶原诱导DBA/1雄性小鼠构建CIA小鼠模型,人参皂苷以15mg/kg的剂量通过尾静脉注射的形式对小鼠进行给药。观察小鼠关节肿胀指数的变化,HE染色切片比较关节组织侵蚀的改善程度,免疫组化定性分析TNF-α、IL-6的表达,流式分析M1型巨噬细胞和T细胞免疫调节的改变,ELISA测定TNF-α和IL-6炎症因子含量的变化,全面考察并比较人参皂苷对模型动物类风湿关节炎的改善作用。最后通过观察和分析小鼠各主要脏器的病理切片,对于人参皂苷作用于实验动物的安全性进行初步评价。结果:体外实验结果表明,在安全浓度范围内,人参皂苷Rg1、Rg3、Rb1对于异常增殖的RAW264.7细胞而言,抑制效果并不明显,而当人参皂苷Rg5、Rh2和CK的浓度在大于或等于50.00 μg/mL时,异常增殖的RAW 264.7细胞表现出一定的被抑制作用。同时,人参皂苷Rg1、Rg3、Rg5和Rb1组的HUVEC细胞异常增殖受阻不明显,人参皂苷Rh2和CK的浓度在高于50.00 μg/mL时,过度增殖的HUVEC细胞存活率开始明显降低。六种人参皂苷都能诱导异常增殖的细胞发生凋亡,对于RAW264.7细胞而言,晚凋比例要稍高于早凋比例,而HUVEC细胞的实验结果则刚好相反。体外实验结果表明人参皂苷Rh2和CK具有更好的促细胞凋亡作用。体内实验结果表明,六种人参皂苷干预后能在一定程度上改善小鼠关节的肿胀程度,其中人参皂苷CK的作用较为明显。关节染色切片显示出现粗糙的各组关节面趋于光滑,肉芽组织消除以及关节腔积液减少等,表明人参皂苷在一定程度上能改善关节组织病变,其中人参皂苷Rh2和CK的改善作用更佳。免疫组化实验结果显示,分别注射不同人参皂苷后,六组小鼠TNF-α、IL-6蛋白表达都有较大程度的下降,与对照组相比均有显著性差异,其中人参皂苷Rh2和CK减弱TNF-α、IL-6蛋白表达的效果最佳。各给药组中M1型巨噬细胞比例均有所下降,CD45+CD4+含量明显降低,但CD45+CD8+含量显著升高,表明人参皂苷能够诱导失调的免疫系统趋于正常化。尽管六组人参皂苷组间差异不显著,但人参皂苷CK在免疫调节中的效果最明显。ELISA实验结果进一步证明,经过人参皂苷干预后,小鼠关节中TNF-α和IL-6炎症因子的含量显著降低,这与前面免疫组化实验结果一致,其中人参皂苷CK仍然表现出最强的作用。对各人参皂苷组作用的小鼠进行病理切片观察,结果显示其主要脏器的形态结构并未发生恶化,表明各人参皂苷的毒副作用较弱,安全可控。结论:通过体内、外实验,观察和比较了六种人参皂苷对类风湿性关节炎的干预效果,并探索了其作用机制。通过比较六种人参皂苷的实验结果,可以得出结论,人参皂苷CK显示出最佳的治疗类风湿关节炎效果,具有研究开发成为治疗类风湿关节炎药物的潜力。
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