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脊髓型颈椎病(Cervical Spondylotic Myelopathy,CSM)一般是指由于颈椎间盘和椎间小关节的退行性改变,如椎体边缘骨赘、韧带增生肥厚等对椎管形成占位从而压迫到硬膜囊或影响脊髓的血供,产生脊髓受压或(和)缺血从而引发的脊髓传导功能障碍性疾病。近几年来,随着社会的进步,人们工作压力的增加,本病的发病率逐年升高,且发病年龄有年轻化趋势,逐渐成为对中老年甚至年轻人造成严重危害的常见颈椎疾患之一。手术疗法是一种常用疗法,因其能够解除由各种原因造成的对脊髓的压迫,同时可以增加相应节段颈椎的稳定性,是目前临床上治疗中重度CSM的重要手段。但对于处于疾病早期阶段、临床症状较轻,或体质较弱不耐受手术的CSM患者,非手术疗法仍然是必要的。通过长期临床实践及小样本的临床观察,本研究所用“益肾养髓方”用于治疗轻中度及非进展期CSM患者能获得比较满意的疗效[1]。
根据本病症状与相关体征,在中医学中当归于“痿证”“痹证”等范畴。病因主要与外感风寒湿、颈部筋肉劳损及肝肾不足等因素有关,久病而导致督脉日渐空虚、髓海趋于枯竭而发为肢体萎弱不用。“益。肾养髓方”正是针对该病本虚标痹之病机,外以除痹通络,内以补益肝肾,内外标本兼治,故能取得较好的疗效。课题组前期研究发现,益肾养髓方可增加大鼠慢性脊髓压迫后脊髓微血管的数量和血管面积,提高CD34分子的表达量,在一定程度上促进脊髓功能的恢复。本研究通过构建CSM动物模型,探讨该复方量效与时效关系,并初步探索益肾养髓方治疗CSM可能的作用机制。
目的:
1.探讨益肾养髓方治疗CSM的量效与时效关系。
2.初步探讨益。肾养髓方在CSM神经修复与细胞凋亡方面可能的效应机制。
方法:
1.量效研究:首先建立CSM动物模型,随后采用7个浓度梯度的益肾养髓方中药进行灌胃,连续给药8周后,全部动物进行脊髓功能测定并处死,取受压脊髓进行检测。采用免疫组化染色、尼氏体染色及Tunel检测等方法,以Basso Beattie Bresnahan(BBB)运动功能评分及受损脊髓中BDNF,NGF,Fas,FasL,Caspase-3等的蛋白表达作为评价指标,探讨益肾养髓方治疗CSM可能的效应机制,同时初步探讨益肾养髓方治疗CSM的ED50(median effective dose)。
2.时效研究:建立CSM动物模型,采用前期量效研究得出的最适中药浓度(EDSO)进行灌胃,各组分别在灌胃前及灌胃18天至灌胃第87天(k=O.8)等9个时间点分批进行脊髓功能测定后处死,取受压脊髓进行检测,采用免疫组化染色等方法,以BBB运动功能评分及受损脊髓中BDNF,NGF,Fas,FasL,caspase-3等的蛋白表达作为评价指标,初步探讨益肾养髓方治疗CSM的ET50(reedian effective time)。
结果:
1.通过对各项指标进行效能回归,最终明确了益肾养髓方治疗CSM的ED50为9.19/kg/d,益肾养髓方治疗CSM的ET50为46.2d。
2.灌胃后中药灌胃组大鼠BBB评分明显高于盐水组,从浓度3(2.659/kg/d)开始差异具有统计学意义(P<0.05),说明益肾养髓方中药灌胃对改善CSM大鼠脊髓功能有一定疗效;HE染色可见,益肾养髓方灌胃可明显改善大鼠受损部位神经细胞形态,减少细胞空洞和水肿的产生;尼氏体染色可见益肾养髓方灌胃可提高受损部位神经元细胞内尼氏体的数目,改善神经元细胞形态,说明其能在一定程度上促进受损脊髓组织的修复;Tunel染色显示,给药组的凋亡指数随着给药浓度的增加而逐渐减低,从浓度4(4.719/kg/d)开始有统计学差异(P<O.05),说明益肾养髓方灌胃可降低脊髓受损后神经元细胞的凋亡水平。
3.量效研究免疫组化形态计量结果显示:①各组BDNF表达量比较,盐水组表达量与假手术组无统计学差异(P>0.05),中药灌胃各组表达量均显著高于假手术组;随灌胃中药浓度增加,BDNF表达量逐渐升高,自2.659/kg/d开始与盐水组有显著差异(P<0.05)@Caspase3表达量各组比较,盐水组和中药灌胃组表达显著高于假手术组(P<0.05),中药灌胃组随浓度增高Caspase3表达量逐渐降低,自2.659/kg/d开始与盐水组有显著差异。⑧盐水组和中药灌胃组FAS、FASL表达与假手术组相比有显著统计学差异(P<0.05),中药灌胃组随浓度升高而表达量逐渐降低,自1.499/kg/d开始与盐水组有统计学差异(P<0.05)。
④各组NGF表达量比较,盐水组表达量与假手术组无统计学差异,中药灌胃各组表达量显著高于假手术组(P<0.05),中药灌胃组自2.659/kg/d开始NGF表达与盐水组有显著差异。
结论:
1.益肾养髓方对慢性脊髓压迫大鼠模型具有较好的治疗效果,能抑制受损脊髓组织的细胞凋亡水平,并在一定程度上可以促进受损细胞的修复。
2.益肾养髓方治疗CSM有一定的剂量依赖性和时间依赖性,其ED50为9.19/kg/d,ET50为46.2d。
根据本病症状与相关体征,在中医学中当归于“痿证”“痹证”等范畴。病因主要与外感风寒湿、颈部筋肉劳损及肝肾不足等因素有关,久病而导致督脉日渐空虚、髓海趋于枯竭而发为肢体萎弱不用。“益。肾养髓方”正是针对该病本虚标痹之病机,外以除痹通络,内以补益肝肾,内外标本兼治,故能取得较好的疗效。课题组前期研究发现,益肾养髓方可增加大鼠慢性脊髓压迫后脊髓微血管的数量和血管面积,提高CD34分子的表达量,在一定程度上促进脊髓功能的恢复。本研究通过构建CSM动物模型,探讨该复方量效与时效关系,并初步探索益肾养髓方治疗CSM可能的作用机制。
目的:
1.探讨益肾养髓方治疗CSM的量效与时效关系。
2.初步探讨益。肾养髓方在CSM神经修复与细胞凋亡方面可能的效应机制。
方法:
1.量效研究:首先建立CSM动物模型,随后采用7个浓度梯度的益肾养髓方中药进行灌胃,连续给药8周后,全部动物进行脊髓功能测定并处死,取受压脊髓进行检测。采用免疫组化染色、尼氏体染色及Tunel检测等方法,以Basso Beattie Bresnahan(BBB)运动功能评分及受损脊髓中BDNF,NGF,Fas,FasL,Caspase-3等的蛋白表达作为评价指标,探讨益肾养髓方治疗CSM可能的效应机制,同时初步探讨益肾养髓方治疗CSM的ED50(median effective dose)。
2.时效研究:建立CSM动物模型,采用前期量效研究得出的最适中药浓度(EDSO)进行灌胃,各组分别在灌胃前及灌胃18天至灌胃第87天(k=O.8)等9个时间点分批进行脊髓功能测定后处死,取受压脊髓进行检测,采用免疫组化染色等方法,以BBB运动功能评分及受损脊髓中BDNF,NGF,Fas,FasL,caspase-3等的蛋白表达作为评价指标,初步探讨益肾养髓方治疗CSM的ET50(reedian effective time)。
结果:
1.通过对各项指标进行效能回归,最终明确了益肾养髓方治疗CSM的ED50为9.19/kg/d,益肾养髓方治疗CSM的ET50为46.2d。
2.灌胃后中药灌胃组大鼠BBB评分明显高于盐水组,从浓度3(2.659/kg/d)开始差异具有统计学意义(P<0.05),说明益肾养髓方中药灌胃对改善CSM大鼠脊髓功能有一定疗效;HE染色可见,益肾养髓方灌胃可明显改善大鼠受损部位神经细胞形态,减少细胞空洞和水肿的产生;尼氏体染色可见益肾养髓方灌胃可提高受损部位神经元细胞内尼氏体的数目,改善神经元细胞形态,说明其能在一定程度上促进受损脊髓组织的修复;Tunel染色显示,给药组的凋亡指数随着给药浓度的增加而逐渐减低,从浓度4(4.719/kg/d)开始有统计学差异(P<O.05),说明益肾养髓方灌胃可降低脊髓受损后神经元细胞的凋亡水平。
3.量效研究免疫组化形态计量结果显示:①各组BDNF表达量比较,盐水组表达量与假手术组无统计学差异(P>0.05),中药灌胃各组表达量均显著高于假手术组;随灌胃中药浓度增加,BDNF表达量逐渐升高,自2.659/kg/d开始与盐水组有显著差异(P<0.05)@Caspase3表达量各组比较,盐水组和中药灌胃组表达显著高于假手术组(P<0.05),中药灌胃组随浓度增高Caspase3表达量逐渐降低,自2.659/kg/d开始与盐水组有显著差异。⑧盐水组和中药灌胃组FAS、FASL表达与假手术组相比有显著统计学差异(P<0.05),中药灌胃组随浓度升高而表达量逐渐降低,自1.499/kg/d开始与盐水组有统计学差异(P<0.05)。
④各组NGF表达量比较,盐水组表达量与假手术组无统计学差异,中药灌胃各组表达量显著高于假手术组(P<0.05),中药灌胃组自2.659/kg/d开始NGF表达与盐水组有显著差异。
结论:
1.益肾养髓方对慢性脊髓压迫大鼠模型具有较好的治疗效果,能抑制受损脊髓组织的细胞凋亡水平,并在一定程度上可以促进受损细胞的修复。
2.益肾养髓方治疗CSM有一定的剂量依赖性和时间依赖性,其ED50为9.19/kg/d,ET50为46.2d。