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以异育银鲫（Carassius auratus gibelio）为研究对象,建立异育银鲫肝微粒体CYP1A和CYP3A活性测定方法,在此基础上研究6种中药对CYP1A和CYP3A的抑制效应,进一步探讨了黄连素对CYP1A和CYP3A的抑制机制;同时,研究了中药黄芩苷和甘草酸对恩诺沙星代谢的影响。本论文分为4篇,第一篇为中药提取物对异育银鲫肝微粒体CYP1A和CYP3A的抑制作用;第二篇是黄连素对异育银鲫CYP450 1A和3A抑制机制的探讨;第三篇是黄芩苷与甘草酸对恩诺沙星在异育银鲫体内代谢的影响;第四篇是CYP450在恩诺沙星的N-脱乙基中的作用。主要内容如下:1.中药对异育银鲫肝微粒体CYP1A和CYP3A的抑制作用在建立的微粒体体系中,研究黄芩、柴胡、连翘、吴茱萸、野菊花和黄连素等6种中药对异育银鲫肝微粒体P450酶的影响,体外测定IC50以及相关酶动力学参数,并推测其可能的作用机制。结果显示,孵育体系内源性物质不干扰测定,方法快捷、稳定、灵敏度高,且6种中药对7-乙氧基异吩唑酮-O-脱乙基酶（EROD） （CYP1A标志酶）的抑制程度为黄连素>黄芩>连翘>野菊花>柴胡>吴茱萸,IC50依次为0.0038,0.27,2.88,7.62,16.20和16.42 mg/mL,酶促反应动力学常数Vmax和Km为83.33±11.32 pmol/（min.mg）和3.05±0.89μM。据此计算黄连素、黄芩、连翘、野菊花、柴胡和吴茱萸的抑制常数分别为0.00028,0.165,0.39,0.61,0.40和0.59 mg/mL;黄连素、黄芩、连翘和吴茱萸对红霉素-N-脱甲基酶（ERND）（CYP3A标志酶）抑制作用很弱,IC50分别为0.68,90.9,70.8和43.5mg/mL,未检测到柴胡和野菊花对ERND有抑制作用。结果表明,这6种中药对CYP酶的影响因亚型不同而区别较大,对CYP1A的抑制均较显著,而对CYP3A的抑制则不明显;同时研究它们对CYP1A的体外抑制机制,推测黄连素、黄芩、柴胡和吴茱萸对EROD的抑制为竞争性抑制,野菊花和连翘则是反竞争性抑制。2.黄连素对异育银鲫CYP450 1A和3A的抑制机制研究为了深入探讨中药对P450的抑制机制,选择黄连素,在异育银鲫体内从药酶活性、蛋白量和蛋白表达水平,探讨了盐酸黄连素对CYP1A和CYP3A的抑制机制。通过单次腹腔注射不同剂量黄连素（5mg/kg,25mg/kg,50mg/kg和100mg/kg）后研究异育银鲫CYP1A和CYP3A活性的变化规律,低剂量（5mg/kg）时肝微粒体的7-乙氧基异吩唑酮-O-脱乙基酶（EROD）与红霉素-N-脱甲基酶（ERND）活性相比对照组没有变化（p>0.05）,高剂量（25mg/kg,50mg/kg和100mg/kg）肝微粒体EROD与ERND活性均随黄连素剂量增加而降低,最大剂量（100mg/kg）时分别比对照组下降了67.27%和85.83%（p<0.01）。Western-blotting表明,给药组肝脏中CYP1A和CYP3A蛋白含量随黄连素剂量增加依次降低,CYP3A的最高剂量（100mg/kg）相比对照下降了88.6%;而CYP1A给药各组与对照相比没有显著性差异（p>0.05）。定量RT-PCR结果显示,给药组肝脏中CYP1A和CYP3A mRNA含量随黄连素剂量增加依次降低,最高剂量（100mg/kg）相比对照分别下降了85.0%和91.5%。由此说明黄连素对CYP1A和CYP3A的调控为抑制,但抑制机制不同,黄连素对1A的抑制主要发生在转录水平,而对3A的抑制在转录水平和翻译水平都有体现。通过体外孵育实验得出,黄连素对EROD的IC50为11.5μM,抑制动力学常数Km和Vmax为0.83μM和102.04 pmol/min per mg protein,Ki为0.85μM;而在体外,黄连素对ERND的抑制作用很弱,IC50为204.3μM,笔者推测黄连素对3A的抑制作用主要发生的体内。综合体内外实验,笔者建议:在与由CYP 1A和3A参与代谢的药物同时使用时,应注意到黄连素增加联合使用药物的血药浓度,改变其药物代谢动力学.3.黄芩苷与甘草酸对恩诺沙星在异育银鲫体内代谢的影响CYP450酶是参与药物代谢的主要的酶系,然而CYP450具有可诱导性,常常会被一些外源性的化学物质（包括许多临床常用药物）所诱导,从而产生药物间相互作用。本文研究了黄芩苷（Baicalin,BL）和甘草酸（Glycyrrhizin,GZ）口灌异育银鲫后对恩诺沙星（Enrofloxacin,EF）在该动物体内代谢的影响。异育银鲫连续7d分别口灌BL（100 mg/kg）、GZ（100 mg/kg）、一组给药后24h腹腔注射EF（10mg/kg）,采用单个动物连续采血,HPLC测定血清EF和环丙沙星（Ciprofloxacin,CF）浓度,分析药动学及其参数;另一组检测肝微粒体CYP1A和CYP3A活性。结果表明,（1）BL和GZ对药物EF的吸收有明显影响,主要表现在峰浓度(Cmax)降低,曲线下面积（AUC）减少。（2）口灌BL和GZ后,实验组EF与CF的AUC与t1/2z明显小于对照组,而清除率（CL）则增大,说明BL和GZ促使EF消除加快。（3）口灌BL和GZ后,BL和GZ的Cmax CF/Cmax EF比值分别1.48%、2.22%,对照为0.95%;BL和GZ的AUCCF/AUCEF比值分别为2.16%、1.76%,而对照组为1.7%。综合Cmax CF/Cmax EF和AUCCF/AUCEF比值可以得出,BL和GZ对EF N-脱乙基具有诱导作用。（4）BL和GZ组7-乙氧基异吩唑酮-O-脱乙基酶（EROD,CYP1A标志酶）和红霉素-N-脱甲基酶（ERND,CYP3A标志酶）活性显著升高（p<0.05）,说明BL和GZ对CYP1A和CYP3A都有诱导作用。结合以上结果,推论BL和GZ加速EF的消除和其代谢产物CF的生成可能与其诱导CYP1A和CYP3A活性有关。4. CYP450在恩诺沙星的N-脱乙基中的作用通过第三篇得到CYP1A与3A的诱导与恩诺沙星代谢相关性较大,本文通过体内诱导诱导和体外抑制CYP450酶后,对异育银鲫恩诺沙星N-脱乙基化代谢的影响。体内试验:异育银鲫连续7d分别口灌β-萘黄酮（BNF）（12 mg/kg）和利福平（RIF）（12 mg/kg）,试验分2组,一组为给药后24 h腹腔注射恩诺沙星（10mg/kg）,采用单个动物连续采血,HPLC测定血浆恩诺沙星和环丙沙星浓度,分析药动学及其参数;另一组提取微粒体,检测肝微粒体CYP1A和CYP3A活性;体外实验:微粒体与恩诺沙星共同孵育,HPLC检测EF的代谢产物环丙沙星的生成率,同时以酮康唑和黄连素作为阴性对照。体内实验结果:（1）口灌利福平和β-萘黄酮后,EF和CF的t 1/2z和AUC均下降,而CLz/F上升,由此可见,2种药物均能促进了恩诺沙星和其代谢产物环丙沙星在体内的消除。（2）口灌利福平和β-萘黄酮后,代谢产物环丙沙星的峰浓度分别为0.435±0.138 mg/L和0.048±0.007 mg/L,对照组为0.099±0.029 mg/L;利福平和β-萘黄酮的AUCCF/AUCEF比值分别为3.69%和1.84%,而对照组为1.76%。综合峰浓度和AUCCF/AUCEF比值,利福平对恩诺沙星N-脱乙基化具有诱导作用。（3）BNF组7-乙氧基异吩唑酮-O-脱乙基酶（EROD,CYP1A标志酶）和RIF组红霉素-N-脱甲基酶（ERND,CYP3A标志酶）活性显著升高（p<0.05）。体外实验结果:RIF组微粒体与恩诺沙星孵育后,环丙沙星生成率上升（p<0.05）,而将酮康唑与空白微粒体一起孵育后,环丙沙星生成率下降（p<0.05）,而BNF组微粒体加BER与EF共同孵育后,CF生成率均没有明显变化（p>0.05）,结合体内外实验结果说明,CYP3A可能参与了在恩诺沙星N-脱乙基化。