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马度米星铵作为一种最广泛使用的抗球虫药,在靶动物体内代谢迅速主要以原形药物排出体外,污染包括水体在内的生态环境。近年来,因食用克氏原螯虾而引起的哈夫病症状与马度米星铵的中毒症状极为相似。本研究旨在探讨马度米星铵对克氏原螯虾的毒性。为确保试验中马度米星铵含量的可靠性与稳定性,首先建立了一种测定水体中马度米星铵的HPLC检测方法并考察了该药物在水体中的稳定性。然后采用半静态鱼类毒性试验方法以克氏原螯虾为模式动物,考察马度米星铵的毒性强弱,并在急毒试验结果的基础上研究其对克氏原螯虾的氧化应激和组织损伤,以及对克氏原螯虾肝胰腺有关基因表达的影响。具体分为以下几个部分:1水体中马度米星铵的HPLC检测方法建立及稳定性考察旨在建立一种准确测定水体中马度米星铵含量的柱前衍生HPLC荧光检测方法,探测水体中添加的马度米星铵浓度是否与实测浓度相一致及在水环境中的稳定性。取水样经HLB柱子净化提取,冰醋酸、丹磺酰肼衍生后,过滤膜用HPLC荧光检测器分析。结果显示:马度米星铵工作液在0.1～100 μg.mL-1范围内呈良好线性相关,回归方程为y=608014x+77137,r2=0.9998。在水体中的添加回收率在80.6～97.3%之间,日内和日间变异系数均小于15%,检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.05μg.mL-1和0.1 μg.mL-1。水体中添加添加低、中、高(1、1 0、100 μg.mL/1)3种浓度马度米星铵原料药,在96 h内的回收率均在80%以上,变异系数均小于10%。本试验建立的方法灵敏度高、重复性好、专属性强,可用于水体中马度米星铵含量的检测且96h内马度米星铵原料药在水体中的稳定性良好,为后期毒性试验中水体实际浓度的测定提供依据并为确定换水时间提供参考。2马度米星铵对克氏原螯虾的急性毒性研究采用半静态鱼类毒性试验方法,试验所用克氏原螯虾驯养一周后用于试验。根据前期预试验结果,确定马度米星铵急性毒性浓度梯度(96 h后全部死亡的最低浓度和全存活的最高浓度),设置30.0、52.5、91.9、160.8和281.4 mg·L-1 5个浓度组、1个空白对照组和1个溶剂对照组处理96 h。急性毒性过程中观察克氏原鳌虾的行为活动,及时取出死亡虾并记录每一天的死亡数量,每两天换水1次并在换水前、后检测水体中各试验组马度米星铵的实际含量。结果显示:受试物溶液中马度米星铵含量均大于理论添加含量的80%;马度米星铵对克氏原鳌虾的24 h、48 h、72 h和96 h LC50分别为 139.28 mg·L-1、103.50 mg·L-1、77.48 mg·L-1、67.03 mg·L-1,96 h 安全浓度 SC 为6.70 mg·L-1。依据水生生物急性毒性分级规定,本试验得到的马度米星铵对克氏原螯虾96 h LC50为低等毒性,表明克氏原螯虾对其有较强的耐受作用。3马度米星铵对克氏原鳌虾的亚慢性毒性作用根据急性毒性试验结果,设定低、中、高3个剂量组(0.7、3.5和7.0 mg·L-1)分别约为96 h LC50的1/100、1/20和1/10,1个空白对照组。检测了马度米星铵对克氏原鳌虾胁迫7、14、28 d过程中,血生化参数与鳃、肝胰腺和肌肉三种组织中抗氧化酶的活力(CAT、SOD、GPx)及MDA含量的变化规律。并与第28 d做组织病理切片观察组织损伤情况。结果显示:与空白对照组相比,血生化参数AST,ALT,CK,LDH显著升高,ATP则显著下降。肝和肌肉中CAT活性先降低后恢复至对照组水平或略有上升,鳃逐渐降低;肝和鳃SOD活性,先下降后逐渐恢复,肌肉仅在28 d时高剂量组显著下降;肝和肌肉中的GPx活性均在暴露14 d后显著升高后逐渐恢复至对照组水平,而鳃则在28天时显著下降;肝和肌肉中MDA无显著改变,鳃组织中MDA在暴露28 d时显著降低,呈剂量依赖性。各剂量组3种组织可见明显病理变化,呈剂量依赖性。鳃组织上皮细胞脱落、呈碎片化,微血管腔结构消失,鳃膜结构受损;肝上皮细胞减少,管腔变大,透明变性;肌纤维不规则排列,肌细胞减少、脱落。结果表明,在亚慢性马度米星铵胁迫下,可能破坏鳌虾的抗氧化系统,引起组织的氧化损伤并导致血液相关参数的改变。4马度米星铵对克氏原螯虾解毒和应激相关基因表达的影响初步探究马度米星铵胁迫下,肝胰腺解毒和应激相关基因表达的变化。通过将克氏原螯虾置于7.0 mg·L-1马度米星铵溶液中,暴露7 d再清除7 d的方法,qRT-PCR检测相关的CYP450、GST、OMX1、COX2、HSP70、MT基因的mRNA表达水平。结果显示:与空白对照组相比,暴露期处理组CYP450、GST、COX1、COX2、HSP70、MT基因表达均显著上调,在清除期则所有基因mRNA表达水平均有所下调。结果表明:马度米星铵胁迫下,克氏原螯虾能通过调节体内与马度米星铵解毒和应激相关的基因的表达,进而诱导相关酶的活力,有效应对马度米星铵胁迫引起的机体氧化应激和毒性效应。