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露地菊(Chrysanthemum morifolium)是园林绿化观赏植物中常用的花卉之一。其花型多、颜色丰富,观赏价值较高。本研究以‘松江白鹤’为实验材料,克隆获得一个花瓣对称性基因。结构分析及同源比对结果表明,该基因为CYC家族基因。以露地菊‘火焰’叶片为外植体,优化了其再生体系,以LjCYC2为目的基因,建立了露地菊的遗传转化体系,并获得转基因株系。主要研究结果如下:1.利用RT-PCR技术从‘松江白鹤’花瓣中分离得到一个花瓣对称性cDNA克隆。经测序及结构分析,该基因全长898bp,具有典型的TCP-domain和R-domain。同源比对结果显示,该基因为CYC家族基因,并与多种花瓣对称性基因具有亲缘关系。2.露地菊叶片外植体再生体系的优化露地菊‘火焰’叶片外植体的最适分化培养基为:MS+0.5 mg/L BA+1.5 mg/L NAA。但不同叶龄的外植体在该培养基上的分化率不同,上部叶片分化频率高达96%,中部叶片分化率为62%,而近根部叶片分化率最低,为37%,可能是不同发育状态叶片其内源激素存在差异的结果。梯度BA浓度对愈伤组织的诱导无明显差异,但在一定范围内,高浓度的BA会促进愈伤组织的不定芽分化率。当BA浓度超过0.5mg/L时,反而会抑制愈伤组织的分化。在本实验中,BA浓度为0.5mg/L的分化培养基M1上生长30d时,外植体分化的不定芽最多,分化率为92%。露地菊转化体系的优化。潮霉素对愈伤组织诱导具有强烈的抑制作用,在浓度为10 mg/L的培养基上培养30d后,部分叶片外植体开始褐化;随着潮霉素浓度梯度的升高,褐化程度逐渐加重;在30mg/L Hyg的培养基中表现为全部死亡。因此,选择压力确定为10mg/L。此外,本试验中探讨的既能有效的抑菌又能最大限度的保证叶片再生的脱菌浓度为300 mg/L的Cef。随着残留农杆菌的减少,可以适时逐步降低培养基中Cef的使用浓度,以便阳性植株的发生。在本实验中探讨的最适预培养时间为2-4d,再生频率都能达到90%以上;最适侵染时间为10min;共培养时间为2d;最适延迟筛选时间为5d。4.建立LjCYC2基因转入露地菊的遗传转化体系,经PCR检测有一个阳性株系。