目的 (1)观察体外培养的不同代数软骨细胞的生物学特性；(2)观察不同代数软骨细胞在明胶海绵上的生物学特性，同时观察明胶海绵作为支架的可行性。为组织工程提供理想的种子细胞和实用价廉的支架；(3)观察软骨细胞在不同培养器皿上的生长特性。探索改良软骨细胞的培养方法。方法 将2周龄的新西兰大白兔软骨细胞用酶消化法分离后，制成一定的浓度悬浮液种植于不同的培养皿上，包括盖玻片、培养板，和涂有鼠尾胶的玻片上进行原代和传代培养；同时，把相应代数的软骨细胞种植于明胶海绵上，应用倒置显微镜和电镜观察不同代数细胞形态学变化、增殖能力，以及不同代数软骨细胞种植于支架后的生长和黏附情况，并绘出各代软骨细胞体外培养时的生长曲线；详细记录各代软骨细胞的贴壁率、存活率以及软骨细胞和明胶海绵形成软骨支架复合体的时间；数据用SPSS软件处理。免疫组化观察Ⅱ型胶原的分泌情况，并结合HE染色，间接评估细胞的生长情况。取冻存后第4天、第8天、第12天的原代软骨细胞给予复苏，观察其存活率和形态。结果 (1)第4代软骨细胞在单层培养时，贴壁率最高，增殖能力最强，分泌功能旺盛，并且保持了软骨细胞特有的表型。(2)第4代软骨细胞种植于支架上形成软骨细胞-支架复合体所需的时间最短，软骨细胞于海绵支架的贴附最紧密。(3)软骨细胞在体外单层培养，传至5代后细胞形态由多角形变成梭形，逐渐丧失表型，出现去分化现象。(4)传代软骨细胞贴壁时间短于原代。(5)涂有鼠尾胶的玻片上的软骨细胞贴壁率最高。(6)冻存后的第4天、第8天、第12天复苏的软骨细胞均保持了特有的表型。最佳复苏时间为第8天。结论 (1)在体外培养的第4代软骨细胞是组织工程的最佳种子细胞，其形成的软骨细胞-支架复合体的质量最佳、时间最短。有望研发成商品化的临床急需的软骨细胞移植安徽医科大学硕士学位论文片。（二）明胶海绵可以作为体外软骨细胞三维培养的较理想支架。（3）体外单层培养时，培养方法以涂有鼠尾胶的玻片培养贴壁率最高。（4）原代软骨细胞冻存后的12天内，复苏的细胞均具有良好活性。