去骨瓣减压术后脑组织水通道蛋白-4表达变化的实验研究

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背景:随着社会经济的不断发展,创伤性脑损伤有逐年增多的趋势,流行病学研究表明重型颅脑损伤的发病率为100~150/10万,死亡率高达30%~50%,有效地控制并降低颅内高压是防止二次脑损伤,阻止病情恶化和降低死亡率的关键。对于临床上常见的急性进展性颅内压增高如急性广泛硬膜下血肿、外伤后急性脑肿胀、恶化型大脑半球大面积梗死等类型,迄今手术仍是治疗以上几种颅内急症的主要方法,而去大骨瓣减压术是处理恶化型颅内高压的常用术式。临床研究表明该术式能降低颅内高压患者的致残率及死亡率,显示了良好的救治效果,但较高的致残率以及部分病人疗效欠佳也引起临床医务人员的重视。近年来一系列关于去骨瓣减压术的基础实验研究也在陆续开展,目的在于研究颅内高压去骨瓣减压术后脑循环脑代谢的变化。近年来发现水通道蛋白-4 (亦称水孔蛋白-4,AQP-4)是广泛分布于脑组织的一种与水通透相关的细胞膜转运蛋白,对脑组织水的转运和平衡调节发挥重要作用,与脑水肿有着密切的关联。目的:本研究通过建立创伤性脑损伤动物模型,探讨AQP-4在创伤性脑水肿的发生、发展中的作用;并结合去骨瓣减压术,探讨去骨瓣减压术后AQP-4表达变化规律,寻找去骨瓣减压术对创伤性脑损伤保护的可能机制,进一步从分子水平上说明去骨瓣减压术的疗效,为创伤性脑水肿的临床治疗寻求更有力的依据。材料与方法:SPF(specific pathogen free)级成年SD(Sprague-Dawley)雄性大鼠90只,体重250g~350g。随机分为假手术组(仅钻孔,不打击)18只,对照组(钻孔后打击,简称C组)36只和去骨瓣减压组(钻孔打击后去骨瓣,简称DC组)36只。各组又根据打击后不同时间点,分为6个亚组,分别为打击后6h、12h、24h、72h、120h和168h,每个时间点6只大鼠(假手术组3只)。损伤后不同时间点进行行为学评分,快速断头取脑损伤处脑组织,每只大鼠取出的脑组织分为三部分,分别用来测定脑组织含水量(干湿重量法)、检测AQP-4 mRNA(PCR法)水平及AQP-4蛋白的表达(Western-Blot)。结果:大鼠脑损伤后死亡率及行为学改变:对照组死亡率高于去骨瓣减压组死亡率,在行为学评分上面,DC组评分高于C组,两组比较差别有统计意义;对照组、去骨瓣减压组在打击后脑组织含水量、脑组织AQP-4 mRNA的表达、脑组织AQP-4蛋白的表达变化趋势基本一致,均在伤后6h明显升高, 24h达到高峰,之后呈逐渐下降趋势;去骨瓣减压组与对照组同时间点的相比,脑组织含水量、脑组织AQP-4 mRNA及其蛋白的表达均有不同程度的下降,且差别有统计意义。结论:自由落体脑损伤后大鼠脑组织含水量在损伤后早期逐渐增高,至24小时到达高峰,之后逐渐下降,打击后脑组织AQP-4 mRNA及其蛋白的表达与脑组织含水量的变化趋势一致;去骨瓣减压术后脑组织含水量减轻,同时脑组织AQP-4 mRNA及其蛋白的表达亦下降。我们推测该术对创伤性脑损伤的保护机制可能与减缓AQP-4 mRNA及其蛋白表达,进而减轻脑水肿和继发性脑损伤,保护脑组织有关。
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