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查尔酮合成酶(Chalcone synthase，CHS)是植物次生代谢途径中黄酮类物质合成的关键酶，仅分布于高等植物中，在植物的抗菌机制、抗胁迫、细胞的发育和分化、花色素的积累和外源基因的表达等方面起着重要的作用。
本实验以中国大豆为材料，利用PCR方法克隆查尔酮合成酶(Chalcone synthase，CHS)全基因，采用SOE法克隆得到去掉内含子的查尔酮合成酶基因，构建pET-GMCHS工程表达质粒，通过大肠杆菌E.coli BL21(DE3)高效表达系统表达大豆CHS。将有活力的E.coli BL21(DE3)-工程菌株导入雪莲提取液中培养，采用液相色谱和质谱分析培养液中的代谢产物，分析结果表明有新的黄酮类物质合成。这对研究黄酮和异黄酮的合成提供了可靠的证据，为我们深入开展对植物次生代谢途径的研究，奠定了一定的基础。取得主要结果如下：
1. 采用CrAB法从我国北方大豆(Glycine max L.Merr.)栽培品种春大豆系列(北丰12)幼芽中提取大豆总。DNA，以此为模板，经PCR反应获得编码查尔酮合成酶的全基因，采用SOE法去掉查尔酮合成酶基因中的一个内含子。测序后核酸序列分析表明，去掉内含子后的基因(CHS-exon)编码区长1170bp，编码390个氨基酸，与已报道的CHS的cDNA序列同源率达到97％。
2. 构建表达载体pET-GMCHS-exon，转化E.coli BL21(DE3)得到工程菌株，工程菌经IPTG(1.5mmol/L)诱导，通过12％SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明，获得了分子量在42.9KD的一条蛋白质特异表达带，此蛋白质特异表达带经过飞行质谱分析，与肽质量指纹图谱(PMF)比对结果表明重组蛋白即查尔酮合成酶(CHS)获得高效表达。
3. 将有活力的E.coli BL21(DE3)-工程菌株导入雪莲提取液中培养，采用液相色谱和质谱分析大肠杆菌E. coli BL21(DE3)高效表达系统在雪莲提取液中的代谢产物，样品和空白对照样对比，样品在273nm，3.0min出现新的吸收峰，在360nm，9.3min吸收峰峰高明显加强，质谱分析结果表明CHS利用雪莲提取液中代谢中间产物合成了新的黄酮类物质。