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第一部分 急性冠脉综合征患者外周血中髓系来源抑制性细胞比例及功能改变目的髓系来源抑制性细胞（MDSCs）是一类具有显著负向免疫调节作用的髓系来源细胞群体,广泛参与肿瘤、感染、自身免疫病、慢性炎症等多种病理过程,然而其在急性冠脉综合征中的作用却尚未见报道。本部分实验旨在探究MDSCs在急性冠脉综合征（ACS）患者外周血中的表达比例及免疫功能改变。方法本部分研究共纳入研究对象169例,其中包括ACS患者73例、稳定性心绞痛（SA）患者40例和对照组（Control）患者56例。临床外周血标本收集后,离心分离血浆-20℃存放备用,并用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞（PBMCs）。采用流式细胞术检测CD14+HLA-DR-/lowMDSCs表达比例。无菌条件下,磁珠分选CD14+HLA-DR-/lowMDSCs,用于细胞培养及mRNA表达测定。采用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）法分析纯化MDSCs中多种活性分子mRNA表达情况。在T细胞-MDSCs共培养体系中,分别采用细胞闪烁计数仪、酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定T细胞增殖及细胞因子分泌情况,分析MDSCs功能变化及其作用机制。采用Bio-PlexProTM蛋白悬浮芯片技术,分析不同患者血浆中多种细胞因子表达情况。结果研究显示,ACS患者外周血PBMCs中CD14+HLA-DR-/low MDSCs表达比例较SA和Control组患者显著增高。ACS患者体内纯化MDSCs中精氨酸酶-1（ARG-1）mRNA表达水平也较SA及对照组患者明显升高。ACS患者体内MDSCs抑制自身T细胞增殖及干扰素-γ（IFN-γ）分泌的作用较SA和Control组患者明显增强,且这一效应可被ARG-1抑制剂nor-NOHA所部分阻断。此外,ACS患者血浆中白介素（IL）-1β,IL-6,IL-33及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达明显上调;且MDSCs表达比例与患者血浆中IL-6,IL-33及TNF-α水平呈现一定相关性。结论MDSCs在ACS患者外周血中表达比例上调,且其抑制T细胞增值及细胞因子分泌的功能增强,其免疫抑制功能增强的可能机制为过表达ARG-1。此外,ACS患者外周血中MDSCs的异常扩增还与多种细胞因子表达水平呈现一定的相关性。提示MDSCs可能在ACS发生发展中具有重要的免疫调节作用。第二部分MDSCs改善心肌梗死后心功能及心室重塑目的心室重塑是急性心肌梗死（AMI）后慢性心功能不全及心力衰竭发生发展的基本病理生理机制,固有免疫及特异性免疫应答均参与了这一过程,然而MDSCs在此过程中的作用尚不清楚。本部分研究旨在探究MDSCs对心肌梗死后心功能及心室重塑的影响。方法采用冠状动脉左前降支（LAD）结扎的方法建立C57BL/6小鼠急性心肌梗死（AMI）模型,假手术（Sham）组小鼠仅予以穿针过线而不行血管结扎。流式细胞术检测术后1、3、7、14天Gr-1+CD11b+MDSCs在骨髓、脾脏、外周血、淋巴结及心脏浸润细胞中的表达。采用免疫磁珠分选纯化AMI小鼠脾脏Gr-1+MDSCs和Gr-1-细胞,并在特定时间点通过尾静脉注射的方式将Gr-1+MDSCs和Gr-1-细胞过继传输于AMI小鼠体内,分别为AMI+MDSCs组和AMI+Con组。术后1天,以TTC染色法分析各组小鼠心脏梗死面积。采用小动物超声检测系统评估术后3、7天各组小鼠心功能情况。术后28天,以Masson染色法分析各组小鼠心肌梗死交界区（PIZ）及非梗死区（NIZ）胶原含量,评价各组小鼠心脏间质纤维化的程度。结果流式细胞术分析显示,小鼠AMI术后MDSCs在不同的免疫器官中呈现时序性表达变化。AMI+MDSCs组小鼠术后1天心肌梗死面积较AMI组和AMI+Con组小鼠降低。术后3、7天,AMI+MDSCs组小鼠心脏功能如左室射血分数（LVEF）、左室缩短率（LVFS）均较AMI组和AMI+Con组小鼠明显改善。此外,AMI+MDSCs组小鼠梗死心脏PIZ及NIZ胶原含量较AMI组和AMI+Con组小鼠均显著下调。生存分析显示,AMI+MDSCs组小鼠心肌梗死后早晚期存活率较AMI组和AMI+Con组小鼠增高。结论心肌梗死后MDSCs呈现动态时序性表达变化,过继传输MDSCs可改善心肌梗死后心功能恶化及心室重塑,并提高心肌梗死后存活率。MDSCs作为一种内源性免疫调节细胞,可能在AMI后心室重塑的过程中发挥了有益的保护作用。第三部分MDSCs抑制心肌梗死后炎症反应及心肌细胞凋亡目的心肌梗死所诱导的局部炎症反应、系统性免疫激活均可介导存活心肌细胞的凋亡,从而促进不良心室重塑的发生。本部分研究旨在分析MDSCs对心肌梗死后心脏局部炎症反应、系统免疫状态及心肌细胞凋亡的影响,探究其改善心肌梗死后心功能及心室重塑的作用机制。方法采用冠状动脉LAD结扎的方法建立C57BL/6小鼠AMI模型,Sham组小鼠仅予以穿针过线而不行血管结扎。免疫磁珠分选法纯化AMI小鼠脾脏Gr-1+ MDSCs和Gr-1-细胞,并在特定时间点通过尾静脉注射的方式将Gr-1+MDSCs或Gr-1-细胞过继传输于AMI小鼠体内,分别为AMI+MDSCs组和AMI+Con组。在术后1或7天,处死小鼠,收集各组小鼠脾脏及心脏组织备用。流式细胞术检测各组小鼠脾脏中Th1/Th2/Th17/Treg的表达情况。采用RT-PCR方法检测各组小鼠心脏组织中多种炎症因子的mRNA表达水平。采用免疫组化染色的方法,分析各组小鼠梗死心脏PIZ炎症细胞浸润情况。采用TUNEL染色,比较各组小鼠术后1天心脏组织心肌细胞凋亡情况,并进一步在MDSCs与小鼠乳鼠心肌细胞（NCMs）共培养模型中,探究MDSCs对脂多糖（LPS）诱导心肌细胞凋亡的直接作用。结果研究显示:与AMI组和AMI+Con组小鼠相比,AMI+MDSCs组小鼠术后7天梗死心脏PIZ促炎细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-17及炎性趋化因子Cxcl-1、Cxcl-1表达均显著下调,而抗炎细胞因子转化生长因子-β1（TGF-β1）、IL-10表达则明显上调。AMI+MDSCs组小鼠梗死心脏PIZ CD3+T细胞浸润数目较AMI组和AMI+Con组小鼠显著减少。流式分析显示,各组小鼠脾脏中Th1/Th2/Th17/Treg表达比例均未见显著性差异。心肌细胞凋亡分析显示,AMI+MDSCs组小鼠术后1天PIZ心肌细胞凋亡率较AMI组和AMI+Con组小鼠显著降低。细胞共培养体系中,MDSCs的加入可显著降低LPS所诱导的NCMs凋亡;另外,阻断NCMs与MDSCs细胞间接触后,MDSCs抗凋亡作用也可被部分阻断。结论MDSCs可能是通过抑制心肌梗死后局部炎症反应及炎症所介导的心肌细胞凋亡,从而在AMI后心室重塑的过程中发挥有益的保护作用。