亮氨酸增强线虫生理活性及延长寿命的机制研究

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生物体寿命调控的研究是现今生命科学学科的重点研究课题。生物体寿命调控的机理极为复杂,由内因与外因共同调节,既取决于基因有关的遗传特性又受到外界环境的影响。近些年的研究发现诸如营养素的摄入、饮食限制等诸多外界因素均可不同程度影响生物寿命的长短。此外一些信号转导通路以及相关基因已经被证明能够影响寿命的长短,然而各类营养代谢通路与衰老调控之间的相互作用尚未明确。本论文以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans,C.elegans)作为模式生物,通过喂食不同浓度的亮氨酸(Leucine,Leu)、异亮氨酸(Isoleucine,Ile)以及缬氨酸(Valine,Val)观测支链氨基酸对线虫寿命及其生理活性的调控作用,并对其分子调控机制进行深入探究。本论文通过喂食秀丽隐杆线虫不同浓度梯度(0.1m M、1m M、10m M)的三种支链氨基酸,观察其对秀丽隐杆线虫寿命的影响。结果发现中浓度(1m M)和高浓度(10m M)亮氨酸能够显著延长线虫寿命。为了进一步的了解亮氨酸对线虫的影响作用,我们分别测定产卵量和身体长度两项指标,发现喂食亮氨酸的线虫体长测量值显著大于对照组线虫(P<0.05)。而在抗逆性检测中,亮氨酸能够显著提高线虫在高温、强氧化与紫外照射等环境下的生存能力(P<0.05)。为了更好的理解亮氨酸对线虫寿命调控作用的分子机制,本文运用局部基因网络技术将氨基酸酸代谢通路成功联入雷帕霉素受体信号转导通路。并通过使用age-1,daf-2和daf-16缺陷性线虫检测亮氨酸对线虫延寿作用是否依赖于上述基因,明确氨基酸与衰老调控通路之间的相互关系。结果为,上述缺陷型线虫在喂食亮氨酸后无法重现与野生型线虫相同的增寿效果。由已知与寿命相关的基因可以构建一个局部基因网络。我们进一步探究了亮氨酸对局部基因网络中部分基因表达的影响。分别采集按照常规方法培养以及喂食1m M亮氨酸5天、10天以及15天的线虫样本。并利用实时荧光定量PCR技术(q PCR)检测相关基因表达量的改变。结果显示,除经典雷柏霉素受体信号通路与胰岛素信号通路中的若干基因外,与秀丽隐杆线虫寿命调控通路偶联的sgk-1、skpt-1、raga-1基因的表达也受到亮氨酸摄食的影响,其中sgk-1与raga-1的基因表达量显著下降(-70%、-59%),skpt-1的基因表达量显著上升(+156%)。但是这些基因表达的变化如何进一步影响寿命需要将来进一步研究。
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