稻瘟病菌相关致病基因MgATG3、MgATG4和MgATG7的克隆和功能分析

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稻瘟病是水稻上重要的病害之一,其病原菌为子囊菌Magnaporthe grisea。了解M.grisea的致病机理不仅有利于稻瘟病的防治,而且作为研究植物病原真菌与寄主互作的理想模式系统,对于了解其它真菌的致病机理也有重要意义。细胞自噬广泛存在于真核细胞内,在饥饿条件下,它可以调节细胞内长寿蛋白和细胞器的降解,降解产物再被细胞重新利用。因此,真核生物在分化和发育的过程中,细胞自噬过程被认为与细胞的形态建成相关,在细胞器和蛋白质周转的过程中发挥重要作用。本文克隆了稻瘟病菌中的自噬基因MgATG3、MgATG4和MgATG7,通过基因取代的方法分析了MgATG4基因在稻瘟病菌致病性及其他相关过程的作用。具体研究结果如下:1.利用酵母中ATG3、ATG4和ATG7基因序列,在稻瘟病菌中找到同源基因,定名为MgATG3、MgATG4和MgATG7。2.通过构建MgATG3、MgATG4和MgATG7基因置换载体和敲除转化,得到MgATG4 Knock-out突变子。通过PCR和Southern杂交分析鉴定出2个Knock-out突变子,明确MgATG4在Guy11菌株中为单拷贝。3.⊿MgATG4突变子的菌落形态与野生型不同,生长速度无明显改变。在N饥饿,C饥饿,高渗(1M NaCl)胁迫条件下的菌落形态,生长速度与野生型比较无明显差异。4.⊿MgATG4产孢能力下降,萌发速度与野生型相比明显减缓。⊿MgATG4突变子对大麦的致病力比野生型大大下降。5.MgATG4基因PBNEATG4荧光蛋白表达载体的设计和构建。
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