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目的:酒精性肝病(alcoholic liver disease, ALD)是指由于长期大量饮酒而导致的肝脏损害,包括单纯脂肪肝、酒精性肝炎及肝纤维化、肝硬化[1]。酒精性肝炎(alcoholic hepatitis,AH)/酒精性肝纤维化(alcoholic liverfibrosis,ALF)是ALD病变过程的重要阶段,以肝细胞脂肪变伴有坏死性炎症为主要特征,进一步导致肝硬化,并是肝细胞癌的致病因素之一。肝细胞凋亡是多种炎症性肝损伤的病理表现,其由多种细胞因子参与的外源性与内源性凋亡信号通路激活致肝实质细胞程序性死亡、进而可诱发肝脏炎症及纤维化。Fas/Fas配体(Fas Ligand, FasL)系统是调节细胞凋亡的主导基因调控系统之一,我们的前期研究发现,Fas/FasL系统在非酒精性脂肪性肝炎的发生及发展过程中起着重要的作用,但其在酒精性肝炎、肝纤维化发病及进展中细胞凋亡的作用及调节机制尚不清楚,针对细胞凋亡信号转导通路中的靶基因调控药物及基因治疗措施亦亟待探讨。本研究旨在探明酒精性肝炎、肝纤维化中Fas/FasL系统及其下游相关基因表达的变化及其在该病进展中的作用,以进一步阐明酒精性肝病的发病机制,为该病的治疗提供新的途径及科学依据。方法:选用健康雄性C57BL/6J小鼠,分别采用含4%酒精Lieber-DeCarli液体饲料4周及联合Lieber-DeCarli液体饲料与微量四氯化碳8周建立小鼠酒精性肝炎、酒精性肝纤维化模型,以等热量麦芽糊精代替酒精喂养小鼠作为对照组。造模完成处死动物,留取血清及肝组织标本,部分肝组织用4%中性甲醛固定,其余肝组织以液氮快速冷冻,-80℃保存备用。血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)及血清门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)采用日本Olympus AU2700全自动生化分析仪酶法测定。肝组织切片采用HE染色观察肝脂肪变、炎症活动及纤维化程度;Masson染色观察肝纤维化程度。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediatednick end labeling, TUNEL)检测肝细胞凋亡情况。分别采用RT-PCR、Western blot及免疫组织化学染色检测肝组织Fas、FasL、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(cysteine aspartate-specific proteases3, caspase3)及细胞色素P4502E1(Cytochrome P4502E1, CYP2E1)mRNA及蛋白表达。实验数据以均数土标准差(x土S)表示,采用SPSS13.0统计软件进行单因素方差分析,用最小显著差-t(the least significant difference-t, LSD-t)检验进行组间比较,P<0.05为差异有统计学意义。结果:应用含4%酒精Lieber-DeCarli液体饲料联合微量四氯化碳腹腔注射可快速建立小鼠酒精性肝炎、肝纤维化模型,且造模方法简单易行,动物死亡率低,模型稳定性好,可作为酒精性肝纤维化研究的实验支撑模型。肝细胞凋亡数随肝脏炎症及纤维化的加重而增高,并伴有凋亡相关基因表达增强,对照组、酒精性肝炎组、酒精性肝纤维化组小鼠凋亡相关基因表达水平依次升高(P<0.05)。1.实验小鼠一般情况对照组小鼠毛发有光泽,体态活泼,饮食及大小便正常;酒精性肝炎组、酒精性肝纤维化组小鼠精神不振,饮食量减少,皮肤弹性差,毛发稀疏。2.实验小鼠血清生化学改变随造模时间延长,酒精性肝纤维化组小鼠血清ALT和AST水平显著高于酒精性肝炎组及对照组(P<0.05)。3.实验小鼠肝组织病理学变化肝组织切片HE及Masson染色显示,对照组小鼠肝组织病理学无明显异常;Lieber-DeCarli酒精液体饲料喂养4周,可见轻~中度肝细胞大泡性脂肪变及肝细胞水样变,小叶内点、灶状坏死伴炎细胞浸润;喂养8周,点灶状肝细胞坏死及炎细胞浸润加重,并可见片状肝细胞坏死,窦周及中央静脉周围纤维组织沉积,汇管区扩大,纤维组织向小叶内延伸,形成桥接纤维化。4. Fas/FasL系统及其下游相关基因在酒精性肝炎/肝纤维化发病及进展中的表达变化酒精性肝纤维化组小鼠肝组织Fas、FasL、TNF-α、caspase3、CYP2E1mRNA及蛋白表达呈一致趋势,酒精性肝纤维化组显著高于酒精性肝炎组及对照组。肝组织切片免疫组织化学染色显示:FasL、TNF-α及CYP2E1阳性细胞主要分布于中央静脉周围的坏死性炎症病灶附近,并与炎症及纤维化的严重程度有关。结论:Fas/FasL系统及其下游信号转导通路的激活可能是酒精性肝病中诱导肝细胞凋亡的主导因素,可进一步促进酒精性肝炎/纤维化的发生与进展。