放疗联合安罗替尼在肺腺癌裸鼠移植瘤模型中抑瘤作用的研究

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目的:探讨盐酸安罗替尼联合放疗对人肺腺癌H1299裸鼠移植瘤抑瘤作用、安全性及其可能机制。方法:将人肺腺癌H1299细胞接种至裸鼠右侧腋窝部皮下,裸鼠肿瘤体积约200mm~3时随机分为4组,每组5只。分为空白对照组、安罗替尼组(安罗替尼3mg/Kg灌胃两周)、放射治疗组(6Gy照射一次)、放疗联合安罗替尼组(药物同安罗替尼组、放疗同放射治疗组)。观察裸鼠一般状态,裸鼠移植瘤体积每3天测量一次,绘制肿瘤体积生长变化曲线,治疗结束后于第二天麻醉后处死裸鼠,剥离瘤体,计算各组肿瘤抑制率和联合效应Q值,细胞凋亡检测法检测肿瘤细胞凋亡情况、苏木精-伊红染色法染色观察各组肿瘤细胞数量情况,免疫组织化学法检测Casapase3、c-Kit、CD34、Ki-67、HIF-1α、VEGF表达情况。CD34抗体检测肿瘤组织微血管密度(MVD),判断肿瘤血管生成情况。取各组裸鼠心、肝、肺、肾组织HE染色评估各脏器损伤情况。结果:处理结束后,裸鼠肿瘤生长在各治疗组均受到抑制,裸鼠活动状态各组均无明显改变,实验期间各组裸鼠耐受性良好。对照组肿瘤体积生长最迅速,与各组间差别均具有统计学意义(p<0.05)。安罗替尼联合放射治疗组比安罗替尼组及放射治疗组抑瘤效果明显,差别具有统计学意义(p<0.05)。安罗替尼组、放疗组、安罗替尼联合放疗组抑瘤率分别为53.25%、36.91%、71.19%。安罗替尼联合放射治疗组联合效应Q值为1.01,提示该联合方案在人肺腺癌H1299裸鼠移植瘤模型中具有协同效应。TUNEL检测提示安罗替尼组与安罗替尼联合放疗组凋亡增加,差异较对照组及放疗组具有统计学意义(p<0.05);HE染色结果表明安罗替尼联合放疗组肿瘤细胞数目减少明显;免疫组织化学法检测判定通过Image J中IHC Profiler插件进行分析,安罗替尼组及安罗替尼联合组中Casapase3表达增加,Ki-67、c-Kit、HIF-1α、CD34均减少,且安罗替尼联合放疗组差异性更为显著。安罗替尼组、安罗替尼联合放疗组中VEGF表达均降低,且安罗替尼联合放疗组更明显,但各组组间差异不具有统计学意义。治疗结束后各组裸鼠心、肺、肾、肝HE染色显示损伤情况在各组间无明显差异。结论:1.安罗替尼对人肺腺癌H1299移植瘤具有抑瘤作用,其机制可能与使肿瘤血管正常化、改善乏氧、抑制c-Kit通路等相关,与放疗联合时具有协同作用。2.本研究中安罗替尼不论是单药还是联合放疗在人肺腺癌H1299移植瘤模型应用中,心、肺、肝、肾脏器损伤均可耐受,安全性良好。
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