非洲猪瘟（Afican swine fever,ASF）是一种由非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起的高度接触、出血性、病毒性的传染病,病死率高达100%,严重危及养猪业发展。自2018年8月非洲猪瘟进入我国以来,随着疫情的发展,在国内发生了跨区域传播,对我国的生猪养殖产业造成了重大影响。迄今为止,国内外针对非洲猪瘟均没有有效的疫苗及治疗方案,因此本研究旨在通过本实验室已有的DNA疫苗和杆状病毒表达系统等技术平台,制备相应的DNA疫苗及亚单位疫苗,通过不同的免疫程序评估候选蛋白的免疫原性。p30（CP204L）、p54（E183L）、p72（B646L）和B602L蛋白在ASFV的复制、组装、入侵和内化等过程中起到了重要的作用,同时也是ASFV的保护性抗原。本研究将以上四个ASFV抗原基因选为研究目标,构建了p CAGGS-p30、p CAGGS-p54、p CAGGS-p72和p CAGGS-B602L等哺乳动物真核表达DNA质粒;同时利用Bac-toBac昆虫杆状病毒表达系统构建了重组杆状病毒:Bac-p30、Bac-p54和Bac-p72-B602L。通过间接免疫荧光试验和Western Blot试验对蛋白表达情况进行了验证,研究结果表明所构建的真核质粒和重组杆状病毒都能有效表达目的蛋白。将制备的ASFV p30、p54、p72和B602L的DNA疫苗及杆状病毒表达蛋白的亚单位疫苗联合免疫4周龄仔猪,免疫三次,每次间隔14天,分为3组,第一组初免DNA疫苗（每种质粒均免疫1 mg）,二免、三免用亚单位疫苗（每种蛋白均免疫500μg）加强免疫,简称“初免-加强组”;第2组三次均为DNA疫苗（每种质粒均免疫1 mg）和亚单位疫苗（每种蛋白均免疫500μg）混和免疫,简称“双加强组”;第3组PBS免疫组。分别于初免第0天、14天、28天、42天采集血清及分离外周血淋巴细胞,用于特异性抗体、中和抗体水平以及外周血淋巴细胞IFN-γELISpot试验检测。实验结果表明:将制备的4种DNA疫苗和三种亚单位疫苗免疫猪后,均能诱导猪产生特异性抗体,且“双加强组”的p54蛋白ELISA抗体在第4周及第6周的OD600值为1.171和1.983,相较于“初免-加强组”的0.431和1.587更高。但即使存在较高的抗体水平,在体外试验中也未能检测到中和抗体;ELISpot实验结果显示:“双加强组”和“初免-加强组”的外周血淋巴细胞,在28天时,使用单一肽段及混合肽段进行刺激后,初免加强组与空白对照组相比则均为差异不显著（P＞0.05）,但双加强组与空白对照组相比差异显著（P＜0.05）;42天时,使用p30、p54肽段进行刺激后,初免加强组与空白对照组相比存在差异显著（P＜0.05）,而双加强组与空白对照组相比,在p30、p54、p72、B602L和混合肽段所有组别中均差异显著（P＜0.05）。综上所述,依据CP204L（p30）、E183L（p54）、B646L（p72）和B602L基因构建的DNA质粒与蛋白的联合免疫,可以诱导产生ASFV特异性抗体及提高特异性细胞免疫水平。在有效、安全、可大规模生产的非洲猪瘟疫苗还未研制成功前,本研究将候选基因通过DNA疫苗及亚单位疫苗免疫动物,在体液免疫及细胞免疫层面鉴定抗原的免疫原性,这将对未来进行ASFV未知功能基因的免疫原性研究以及ASFV DNA和亚单位疫苗的研究提供借鉴。