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肿瘤细胞不同于正常细胞的特征在于其不断的自我复制、顽固的逆分化和凋亡。细胞增殖失控是肿瘤发生的重要环节，与细胞周期调控紊乱密切相关。我们从细胞周期调控角度探讨了G1期重要的调控分子在血液系统肿瘤细胞以及造血干／祖细胞增殖、分化、凋亡中的作用。 论文第一部分，我们以六亚甲基二乙酰胺(HMBA)体外处理HL-60、U937细胞建立肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡模型，研究Cyclin D、Cyclin E、p27及相关基因c-myc、Rb、Bcl-2在该细胞模型中的表达变化及其意义。结果表明，HMBA干预HL-60、U937细胞72小时后，CD11b表达显著升高(如4mMHMBA处理组CD11b分别达69.90±5.02％、46.41±7.80％)；高剂量HMBA促使Annexin-V表达增加(4mMHMBA组分别为8.90±0.81％、11.23±5.57％)；同时细胞周期分析显示HL-60、U937细胞大量阻滞于G1期。在所建立的这一细胞增殖、分化、凋亡模型中，我们发现Cyclin D、p27表达显著增高，呈剂量依赖关系(如在HL-60细胞中4mM组Cyclin D表达为63.00±13.55％，p27为67.65±10.49％)；而Cyclin E表达明显下调(如HL-60细胞4mM组Cyclin E表达为1.33±0.23％)，也呈剂量依赖关系。相关基因c-myc、Rb、Bcl-2的表达在该细胞模型中也发生显著的改变(如HMBA可使HL-60细胞c-myc、Bcl-2 mRNA表达均下调，而Rb mRNA表达则上调)。结果提示Cyclin E、p27以及有关的相关基因可能参与了白血病细胞的增殖、分化、凋亡机制，因此设法下调Cyclin E、上调p27就有可能为抑制肿瘤细胞的增殖和促使其分化、凋亡提供新的策略。从细胞周期的角度探索细胞增殖、分化、凋亡的机制国内外文献鲜见报道。 在第二部分，我们以p27基因转染实验来进一步证实p27对肿瘤细胞增殖、分化、凋亡的影响。成功地构建了p27基因真核表达载体pEGFP-C1／hp27，以此载体和腺病毒载体Adp27分别转染／感染HL-60和Raji细胞。pEGFP-C1／hp27电击转染率(HL-60)为31.9％：AdLacZ感染率(HL-60和Raji)分别为40.3％、32％；RT-PCR均显示有显著的p27基因mRNA表达。p27基因导入HL-60和Raji细胞均可致明显的细胞生长增殖受抑；同时导致HL-60细胞CD11b显著增加(如72小时，pEGFP-C1／hp27转染致HL-60 CD11b表达为27.9±4.1％；Adp27感染复口.人学医学博卜学位论文为33.8士5.1%);Adp27感染HL一60、Raji引起显著的细胞凋亡(如72小时，AnnexinV十PI一率分别达46.9士9，5%、35.7士11 .2%)。本部分结果证实了p27可显著抑制肿瘤细胞的增殖，并显著促使其分化、凋亡，提示p27在细胞增殖、分化、凋亡中的重要性，为可能的进一步应用p27基因进行血液系统肿瘤的基因治疗奠定基础。未见文献报道。 论文第三部分实验中，我们以RNAi技术阻断了处于细胞周期进展核心地位的CDKZ基因的表达。将CDKZ SIRNA质粒(pBS用6/CDKZ)经电击穿孔法转染HL一60细胞，Rl’- PCR显示CDKZ基因mRNA的表达显著下调，并呈现出时间依赖性;CDKZ siRNA转染后，HL一60细胞生长增殖明显受抑;同时分化标记CDllb表达显著增高(24小时、48小时、72小时分别为17.肚2.3%、30.2士3.5%、49.7士11 .6%)提示HL一60细胞趋向粒/单系的分化。结果表明CDKZ表达下调参与了肿瘤细胞增殖、分化的机制，这为从细胞周期角度干预肿瘤细胞增殖、促使其分化继而达到抗肿瘤的目的提供又一新的途径。国内外未见文献报道。 论文第四部分，我们自行构建了p27 SIKNA表达质粒(P sileneer U6一1 .0/hP 27)，测序证实有完整的插入序列，表明构建成功。将此质粒以电击方式转染脐血eD34+细胞，转染效率为27.1一3 1 .4%;转染后Rl’- peR证实en34+细胞p27基因mRNA表达显著下调，说明我们构建的p27 siRNA质粒有效;转染p27 SIRNA质粒的CD34+细胞总数显著高于空质粒组(第6、9天分别为:6.1士0.2 x 106/mlvs 3.7士0.5 X 106/ml，p<0.05、7.6士o.sxlo6zmlvs4.l士o.6Xlo6/ml，p<0.05)，同时保留CD34标记的阳性率也显著高于空质粒组(第6、9天分别为:84.5士6.1%Vs 48.4士3.9%，p<0.05、63.3士3.2%Vs 28.7士5.4%，p<0.05)。本部分结果表明以p27 SIRNA干扰方式可致脐血.CD34+细胞明显扩增，而不影响其分化潜能，可为体外扩增脐血CD34+细胞开辟崭新的途径，这不同于既往应用细胞因子扩增CD34+细胞可造成细胞分化，对于提高CD34+造血干/祖细胞的移植效能将具有十分重要的意义。未见文献报道。