在转基因家蝇的研究中，我们发现了一种热稳定的具有DNase样活性的蛋白质。该蛋白在80℃加热20min后，仍然具有降解质粒DNA的核酸内切酶活性。为了对此蛋白的生物学特性进行深入的研究，我们拟利用现代生物学技术，首先提取纯化少量目的蛋白，通过肽质量指纹图谱分析确定其身份；然后根据GenBank中相关序列信息设计引物，克隆该蛋白的全长cDNA；最后构建不同的表达载体，在不同的宿主细胞中进行表达，并对表达产物的生物学活性进行鉴定。 首先，利用DEAE-52离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析等蛋白质纯化技术，从家蝇幼虫中提取纯化到一种耐热的具有DNase样活性的蛋白质。通过肽质量指纹图谱分析，并结合该蛋白与L-DOPA特异性的显色反应，初步证明这种耐热DNase样活性蛋白是酚氧化酶。 根据GenBank中收录的家蝇酚氧化酶原DNA序列设计引物，利用RT-PCR技术，从家蝇幼虫总RNA中克隆了酚氧化酶原(PPO)及酶(P0)的全长cDNA。经序列分析得知：它们完整的开放阅读框长度分别为2052 bp和1908 bp，分别编码683和635个氨基酸。与GenBank中收录的家蝇幼虫酚氧化酶原及酶的cDNA分别具有97％、97-3％同源性，氨基酸序列的同源性为98.5％、98.9％。 分别构建了原核表达载体pET-PO<,12>和pET-PPO<,12>，在人肠杆菌中进行了表达研究。RT-PCR检测证明，家蝇幼虫酚氧化酶及酶原的cDNA在大肠杆菌中得NT转录，但SDS-PAGE未检测到目的蛋白的表达。 构建了真核表达载体pVAX1-PO<,34>和pVAX1-PPO<,34>，通过脂质体法转染HeLa和MDCK细胞，进行了表达研究。经Western Blot检测，证明了家蝇幼虫酚氧化酶及酶原在HeLa细胞中实现了表达。表达产物在80℃加热20 min后，仍然具有DNase样活性，表现出和提取的家蝇幼虫酚氧化酶相同的生物学特性。 我们的研究证明，家蝇幼虫酚氧化酶除了氧化活性外，还具有热稳定的DNase样活性，是一种双功能酶。这一发现预示了酚氧化酶可能在免疫系统中扮演着其他重要的角色，为酚氧化酶确切生理功能的研究提供启发和借鉴。 同时，我们利用SMART技术构建了家蝇幼虫的cDNA文库，原始文库的滴度为1.31×10<5>cfu/mL，重组率为90％，插入片段长度分布范围为400～3000 bp，为筛选家蝇幼虫的cDNA基因建立了良好的平台。